多柔比星-五味子乙素共載脂質(zhì)體克服腫瘤多藥耐藥的研究.pdf

1、背景:
　　腫瘤細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物產(chǎn)生多藥耐藥性(multidrug resistance，MDR)是腫瘤化療失敗的主要原因，也是困擾腫瘤治療的一大難題。藥物載體作為一種新型的MDR逆轉(zhuǎn)策略，具有多種優(yōu)勢(shì)而成為研究熱點(diǎn)，前期多柔比星(Doxorubicin，DOX)脂質(zhì)體已被證明可部分克服腫瘤多藥耐藥。而從植物五味子提取的五味子乙素(Schisandrin B，Sch B)已被證明具有抑制P-gp和促進(jìn)凋亡作用。
　　目的:<

2、br>　　本論文試制多柔比星-五味子乙素共載脂質(zhì)體(Doxorubicin-Schisandrin Bco-liposomes，DSCL)，探討五味子乙素與脂質(zhì)體對(duì)克服腫瘤MDR的協(xié)同作用。
　　方法:
　　探討其制劑的優(yōu)化、對(duì)多柔比星的細(xì)胞積聚、細(xì)胞攝取及細(xì)胞外排的影響，并分析該制劑克服腫瘤細(xì)胞MDR的可能機(jī)制，同時(shí)建立荷瘤耐藥小鼠以評(píng)價(jià)其藥效學(xué)。
　　結(jié)果:
　　首先采用硫酸銨梯度法制備DSCL，建立HPLC

3、藥物濃度測(cè)定方法，分別通過(guò)藥物磷脂比和磷脂膽固醇比優(yōu)化制備方法，最終獲得多柔比星包封率為93.96±3.30％，五味子乙素包封率為87.81±1.97％，粒徑為163±102nm，Zeta電位為-23±4mv，體外體外釋放實(shí)驗(yàn)和體外穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)說(shuō)明DSCL符合后續(xù)研究。
　　然后，以人白血細(xì)胞系K562/DOX耐藥細(xì)胞為模型細(xì)胞，以多柔比星溶液(F-DOX)、五味子乙素+多柔比星混合液(Sch B+DOX)、多柔比星脂質(zhì)體(DOX-

4、L)、多柔比星脂質(zhì)體與五味子乙素混合液(DOX-L+Sch B)、維拉帕米+多柔比星混合液(Ver+DOX)為對(duì)照，分別比較DSCL組和對(duì)照組的細(xì)胞毒性不同，并測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)入耐藥細(xì)胞的DOX藥物量差別，繪制藥物濃度隨時(shí)間變化曲線。結(jié)果顯示DSCL逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別是Sch B+DOX組、DOX-L組和DOX-L+SchB組的1.68、14.52和1.42倍。DSCL使DOX進(jìn)入耐藥細(xì)胞K562/DOX的藥物量是DOX-L、Sch B+DO

5、X的1.30和1.21倍，且具有延緩?fù)馀抛饔?。說(shuō)明DSCL具備良好的克服腫瘤多藥耐藥作用，脂質(zhì)體和五味子乙素顯示了良好的協(xié)同作用。
　　為了進(jìn)一步了解DSCL克服腫瘤MDR機(jī)制，我們?cè)O(shè)計(jì)了內(nèi)吞抑制劑和低溫?cái)z取實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示K562/DOX細(xì)胞攝取DSCL主要通過(guò)耗能的內(nèi)吞途徑。而P-gp表達(dá)和凋亡實(shí)驗(yàn)證實(shí)了DSCL克服腫瘤MDR可能是通過(guò)抑制P-gp表達(dá)和促進(jìn)凋亡雙通道途徑。
　　最后，運(yùn)用K562/DOX細(xì)胞嫁接法建立了荷