厄他培南對米卡芬凈大鼠體內(nèi)藥動學(xué)的影響.pdf

1、目的：建立大鼠血漿中米卡芬凈HPLC及游離米卡芬凈的UPLC測定方法，并考察厄他培南對米卡芬凈在大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)的影響，完善兩藥合用的藥代動力學(xué)研究。
　　方法：色譜條件：HPLC，色譜柱為Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm)，流動相為乙腈：0.01 mol/L醋酸銨緩沖液(以冰醋酸調(diào)至 pH4.5)(42.5:57.5，V/V)，檢測波長269 nm，流速1.0 mL/min，柱溫30℃，進(jìn)樣量1

2、0μL，選擇艾瑞昔布為內(nèi)標(biāo)；UPLC，色譜柱為Acquity UPLC? BEH C18柱(2.1 mm×50 mm，1.7μm)，流動相為乙腈：0.01 mol/L醋酸銨緩沖液(以冰醋酸調(diào)至pH4.5)(45:55，V/V)，檢測波長269 nm，流速0.2 mL/min，柱溫30℃，進(jìn)樣量2μL。
　　動物實(shí)驗(yàn)方法：將健康雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分為2組，每組20只，對照組大鼠尾靜脈注射給予米卡芬凈15 mg·kg-1，實(shí)驗(yàn)組

3、大鼠尾靜脈注射給予厄他培南100 mg·kg-1和米卡芬凈15 mg·kg-1，分別于給藥后2、10、20、30 min和1、2、3、4、6、12、24 h于眼內(nèi)眥取血0.5 mL，置于含肝素鈉的抗凝離心管中，離心(10000 r·min-1)5 min后取上層血漿，置-40℃冰箱保存待測。
　　血漿處理方法：血漿藥物濃度測定，取大鼠血漿100μL，置1.5 mL離心管中，加乙腈400μL以及內(nèi)標(biāo)溶液10μL，渦旋混合1 min，

4、離心(10000 r·min-1)5 min，取上清液100μL于進(jìn)樣瓶中，10μL進(jìn)樣并測定；游離藥物測定，取大鼠血漿300μL，置玻璃細(xì)管中，加入中空纖維，離心(6000 r·min-1)10 min，取中空纖維內(nèi)超濾液，2μL進(jìn)樣并測定。
　　藥動學(xué)參數(shù)處理方法：用DAS2.1.1軟件對每只大鼠的系列血藥濃度進(jìn)行統(tǒng)計矩自動擬合得到藥動學(xué)參數(shù)，用SPSS13.1軟件對2組的主要藥動學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。若進(jìn)行比較的2組數(shù)據(jù)均服

5、從正態(tài)分布，用兩個獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，若其中任意一組不服從正態(tài)分布，用非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行分析。當(dāng)檢驗(yàn)的P<0.05時則認(rèn)為兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：HPLC中，米卡芬凈的保留時間為7 min，艾瑞昔布的保留時間為11 min，血漿內(nèi)源性雜質(zhì)對其濃度的測定無干擾；標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.0443X-0.0025，(r2=0.9994)，線性范圍1~200μg·mL-1；米卡芬凈低(1.5μg·mL-1)、中(25μg·mL-1

6、)、高(160μg·mL-1)三個濃度的絕對回收率依次為(99.10±3.96)％、(90.10±4.43)%和(95.00±3.49)%，相對回收率分別為(101.7±6.1)%、(108.4±7.3)%和(103.8±8.0)%，艾瑞昔布的絕對回收率為(97.70±4.18)%；米卡芬凈低、中、高三個濃度的日內(nèi)RSD分別為6.3%，7.9%和7.7%，日間RSD分別為8.4%，8.9%和8.6%；米卡芬凈血漿樣品于-40℃低溫保存1

7、4天及反復(fù)凍融三次后性質(zhì)穩(wěn)定，且處理后的血漿樣品于4℃放置24 h對測定無影響。
　　UPLC中，米卡芬凈保留時間為2.33 min，無血漿內(nèi)源性雜質(zhì)干擾；標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=9259X-26.721，(r2=0.9999)，線性范圍20~640μg·mL-1；米卡芬凈低(40μg·L-1)、中(160μg·L-1)、高(512μg·L-1)三個濃度的絕對回收率依次為(91.81±6.17)%、(96.83±1.59)%和(90.61±

8、3.29)%，相對回收率分別為(94.05±4.12)%、(99.52±2.10)%和(96.97±3.64)%；米卡芬凈低、中、高三個濃度的日內(nèi)RSD分別為2.5%，1.4%和0.6%，日間RSD分別為3.8%，3.5%和3.4%。
　　藥動學(xué)參數(shù)：血漿濃度測定部分，實(shí)驗(yàn)組和對照組主要藥動學(xué)參數(shù)如下，AUC0-24h分別為(294.9±25.6) mg·h·L-1和(301.2±41.0) mg·h·L-1；AUC0-∞分別為(

9、349.4±28.0) mg·h·L-1和(359.5±53.9) mg·h·L-1；t1/2分別為(9.261±0.935) h和(9.295±1.133) h；V分別為(0.577±0.077) L·kg-1和(0.568±0.087) L·kg-1；CL分別為(0.043±0.003) L·h-1·kg-1和(0.043±0.007) L·h-1·kg-1；Cmax分別為(65.95±9.71) mg·L-1和(84.13±12.

10、98) mg·L-1。實(shí)驗(yàn)組的AUC0-24h、AUC0-∞、t1/2、CL和V與對照組相比均無顯著性差異(P>0.05)，實(shí)驗(yàn)組的Cmax與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。
　　結(jié)論：本文所建立法測定大鼠血漿中米卡芬凈濃度的HPLC-UV及UPLC-UV法，方法新穎、分析速度快、靈敏度高。全面進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證后，證明所建立的方法專屬性、靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度較好，適用于厄他培南對米卡芬凈大鼠體藥動學(xué)變化的研究。