杜氏鹽藻hsp70基因的克隆及其肌動(dòng)蛋白基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)bar基因作為轉(zhuǎn)基因篩選標(biāo)記.pdf

1、杜氏鹽藻(Dunaliella Salina D.salina)為一種無細(xì)胞壁的單細(xì)胞真核綠藻,是迄今為止所發(fā)現(xiàn)世界上最耐鹽的植物之一,其抗逆力極強(qiáng),能在0.05M-5MNaCl的環(huán)境中生存.熱休克蛋白(hsp)70家族是目前已知的最保守的蛋白家族之一.在綠色植物和藻類,不同hsp70基因的編碼產(chǎn)物分布在胞漿、葉綠體和線粒體內(nèi),參與新生蛋白質(zhì)的正確折疊、轉(zhuǎn)運(yùn)及其降解,對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和各種環(huán)境的適應(yīng)都起著重要作用.光和熱脅迫均可誘導(dǎo)生

2、成大量的hsp70 mRNA.因此,作為誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物,其hsp70基因啟動(dòng)子已經(jīng)被用于構(gòu)建轉(zhuǎn)基因萊茵衣藻表達(dá)載體,并得到了成功的轉(zhuǎn)化.該研究根據(jù)hsp70在各物種間高度保守這一特點(diǎn),克隆得到定位在胞漿的杜氏鹽藻hsp70基因組DNA全長(zhǎng)以及其兩側(cè)調(diào)控序列,并初步探討hsp70 mRNA表達(dá)水平以及與光和熱誘導(dǎo)的關(guān)系,為下一步杜氏鹽藻表達(dá)載體的構(gòu)建奠定基礎(chǔ).結(jié)論1.PPT對(duì)pDSBAR轉(zhuǎn)化野生型杜氏鹽藻的成功篩選,提示bar基因可能作為轉(zhuǎn)

3、基因杜氏鹽藻的主要篩選標(biāo)記基因.2.克隆得到杜氏鹽藻胞漿定位的hsp70基因組DNA序列及其兩側(cè)調(diào)控序列,其中5'側(cè)調(diào)控序列中包含有2個(gè)熱休克元件.杜氏鹽藻hsp70 mRNA水平增高與光、溫度誘導(dǎo)均有關(guān)系,因此,該基因啟動(dòng)子的克隆為誘導(dǎo)型轉(zhuǎn)基因杜氏鹽藻表達(dá)載體的構(gòu)建奠定了基礎(chǔ).該編碼基因中GC/AT比值增高,密碼子有顯著的偏愛性,提示待轉(zhuǎn)化的外源基因也應(yīng)該具有相似的密碼子偏愛.3.克隆得到杜氏鹽藻肌動(dòng)蛋白基因兩側(cè)調(diào)控序列,該基因5'側(cè)