應(yīng)用“微流控芯片”技術(shù)探討PQQ與bFGF促進雪旺細胞增殖的實驗研究.pdf

1、目的:
　　本研究通過設(shè)計和制作新型“微流控芯片”(Microfluidic chips)，在體外三維流動性微環(huán)境中，探討細胞因子PQQ單獨和聯(lián)合bFGF對SD大鼠雪旺細胞(Schwanncell，SCs)的增殖作用，并對比其與傳統(tǒng)細胞培養(yǎng)平臺的異同。
　　方法:
　　(1)提取3-5天SD大鼠乳鼠坐骨神經(jīng)，解剖顯微鏡下剝除神經(jīng)外膜和纖維膜，雙酶消化法提取雪旺細胞并進行培養(yǎng)和擴增，倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和計數(shù)，應(yīng)用免

2、疫組化熒光染色技術(shù)行雪旺細胞鑒定;
　　(2)設(shè)計和制作了兩種微流控芯片，并分別對其可用性進行測定和檢驗;
　　(3)將提純后培養(yǎng)的第3代雪旺細胞與膠原混合后置于單通道微流控芯片內(nèi)，微量泵內(nèi)加入PQQ生物因子，觀察1周后記錄細胞的生長情況并計算其增殖率，與二維環(huán)境下普通培養(yǎng)進行比較。
　　(4)將提純后培養(yǎng)的第3代雪旺細胞與膠原混合后置于11通道濃度梯度微流控芯片內(nèi)，芯片入口端同時泵入PQQ和bFGF生物因子，分別記錄

3、1、2、3、4周時細胞的生長情況并計算其增殖率，并與二維環(huán)境下普通培養(yǎng)進行比較。
　　結(jié)果:
　　(1)從3-5天SD大鼠中提取的雪旺細胞，提純后細胞生長情況良好，倒置顯微鏡下雪旺細胞為雙極長梭形，呈尖對尖或并排排列，細胞較多時亦可聚集成簇，胞核為卵圓形，純度可達95％以上，S-100免疫組化熒光染色鑒定證明為大鼠雪旺細胞;
　　(2)制作的微流控芯片密閉性良好，濃度值經(jīng)檢測后與理論值基本相符，可以被應(yīng)用于細胞因子篩選

4、實驗;
　　(3) PQQ單獨促進雪旺細胞增殖時，在100nmol/L PQQ組具有最大細胞數(shù)量;
　　(4) PQQ聯(lián)合bFGF促進雪旺細胞增殖時在30ng/mlPQQ和7ng/ml bFGF具有最大增殖效應(yīng)。
　　結(jié)論:一定濃度的PQQ可促進大鼠雪旺細胞增殖，但濃度過高反而抑制增殖;一定濃度組合的PQQ和bFGF對大鼠雪旺細胞可協(xié)同產(chǎn)生最大的增殖效應(yīng);微流控芯片技術(shù)可以用于周圍神經(jīng)組織工程領(lǐng)域，具有廣闊的應(yīng)用前景。