奇異果甜蛋白thaumatin基因二價(jià)載體在玉米中的共表達(dá)及其在酵母中的表達(dá).pdf

1、Thaumatin是一種超甜蛋白，本實(shí)驗(yàn)室將thaumatin和PDI上游分別連上CaMV35S啟動(dòng)子，下游連上終止子，同時(shí)克隆于質(zhì)粒pCAMBIA1302中，構(gòu)建成二價(jià)協(xié)同表達(dá)載體pCAMBIA1302-TP，經(jīng)測(cè)序證明了它們的正確性。將pCAMBIA1302-tha-PDI轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌LBA4404，侵染玉米18紅新鮮幼胚及其誘導(dǎo)產(chǎn)生的胚性愈傷組織，擬通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)得到玉米陽(yáng)性植株。由于愈傷在侵染后分化條件的不成熟使本實(shí)驗(yàn)未能如期得

2、到陽(yáng)性植株，但摸索出了玉米幼胚誘導(dǎo)胚性愈傷的方法以及條件影響因素，并獨(dú)創(chuàng)了一套切實(shí)可行的農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化玉米幼胚及胚性愈傷組織的可靠方法。鑒于奇異果甜蛋白thaumatin基因在玉米中難以表達(dá)的研究現(xiàn)狀，本文擬將thaumatin基因轉(zhuǎn)化釀酒酵母，獲得轉(zhuǎn)基因酵母菌株，再利用酵母菌的大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)，獲得大量的有活性的甜味蛋白。通過(guò)基因工程技術(shù)，本文構(gòu)建了酵母表達(dá)載體pDBLeu-thamatin，經(jīng)測(cè)序證明其正確性。將pDBLeu-tham