中國人CTLA-4的單克隆抗體制備及其生物學(xué)活性研究.pdf

1、我們用基因工程表達(dá)的人CTLA-4蛋白作為免疫原,采用細(xì)胞融合、ELISA法和免疫印跡等方法制備并篩選到了鼠抗人CTLA-4的單克隆抗體,并以兩種方法測定了抗人CTLA-4抗體對淋巴細(xì)胞增殖的影響,以及利用抗體的結(jié)合特性觀察了淋巴細(xì)胞表達(dá)CTLA-4的情況.結(jié)果發(fā)現(xiàn)我們得到了4株單克隆抗體（1H7、2G2,2F11,3A7）,它們均可與近似天然構(gòu)象的人CTLA-4Ig融合蛋白結(jié)合,又可與大腸桿菌表達(dá)出的經(jīng)復(fù)性后的人CTLA-4蛋白結(jié)合,

2、并且可分別識別人CTLA-4Ig融合蛋白不同抗原決定簇.其中一株（3A7）既和近似天然構(gòu)象的蛋白結(jié)合又可與變性的蛋白結(jié)合,并具有顯著阻斷CTLA-4的抑制性免疫信號傳遞,促進(jìn)混合淋巴細(xì)胞及經(jīng)ConA刺激后淋巴細(xì)胞的進(jìn)一步活化、增殖的功能.此外,熒光標(biāo)記的抗體結(jié)合實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)單抗3A7不僅可以和人的CTLA-4蛋白結(jié)合,還可和小鼠的CTLA-4蛋白結(jié)合,而且小鼠的腺臟淋巴細(xì)胞體外在ConA刺激培養(yǎng)后,第三、四天CTLA-4表達(dá)量較高,第二