基于ICC降糖三黃片防治DGP的機(jī)制探討及中藥干預(yù)的循證研究.pdf

1、文獻(xiàn)研究:
　　糖尿病胃輕癱(DGP)是糖尿病常見消化道并發(fā)癥之一。DGP可影響血糖控制，降低患者生活質(zhì)量，增加糖尿病心腦血管并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)，因此本病的防治十分重要。然而，現(xiàn)代西醫(yī)學(xué)對(duì)于本病的療效不確切，且存在諸多局限性，故亟需探尋更有效的防治手段。DGP屬于中醫(yī)學(xué)“痞證”范疇，“肝郁脾弱”為本病的傳統(tǒng)病機(jī)認(rèn)識(shí)，“疏肝健脾”為一般論治原則?；谑韪谓∑⒎ǖ闹嗅t(yī)藥手段可有效干預(yù)DGP，但目前缺乏相關(guān)循證證據(jù)支持。已證實(shí)，由SCF/c-k

2、it通路調(diào)控分化產(chǎn)生的Cajal間質(zhì)細(xì)胞(ICC)是胃腸動(dòng)力系統(tǒng)的基本單位，在胃腸動(dòng)力的產(chǎn)生與維持上起著關(guān)鍵作用，ICC數(shù)量、形態(tài)、功能上的異常與多種胃腸動(dòng)力障礙性疾病密切相關(guān)，因此ICC是近年DGP病因?qū)W及藥效學(xué)的研究熱點(diǎn)。降糖三黃片是我院熊曼琪教授為首的課題組在桃核承氣湯的基礎(chǔ)上加減化裁制成的特色中成藥，多年來應(yīng)用于2型糖尿病及其并發(fā)癥的防治，療效顯著，其作用機(jī)制已被較多基礎(chǔ)研究證實(shí);然而，至今尚無該藥在糖尿病胃腸病變的應(yīng)用報(bào)導(dǎo)。<

3、br>　　循證研究:
　　目的:
　　胃腸激素異常是DGP的重要原因之一，多個(gè)研究發(fā)現(xiàn)DGP患者血漿胃腸激素水平與健康人群比較存在顯著差異，但各種胃腸激素與DGP的相關(guān)性目前尚無確切結(jié)論。因此，本研究擬用Meta分析的方法探討胃腸激素與DGP的相關(guān)性，在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步借助系統(tǒng)評(píng)價(jià)法，從胃腸激素、胃排空功能、證候療效、糖代謝等角度全面評(píng)價(jià)疏肝健脾中藥對(duì)DGP的干預(yù)作用。
　　方法:
　　1.胃腸激素與DGP相關(guān)性

4、的循證研究:根據(jù)自擬的納入及排除標(biāo)準(zhǔn)，全面檢索探討胃腸激素與DGP相關(guān)性的文獻(xiàn)，并篩選其中符合研究目的的文獻(xiàn)，形成納入文獻(xiàn)。提取納入研究的基本信息及胃腸激素指標(biāo)，并通過RevMan5.3統(tǒng)計(jì)軟件實(shí)施Meta分析，計(jì)算合成統(tǒng)計(jì)量，以此說明胃腸激素與DGP的相關(guān)性。
　　2.基于胃腸激素疏肝健脾中藥治療DGP的系統(tǒng)評(píng)價(jià):全面檢索以胃腸激素為主要觀察指標(biāo)、疏肝健脾中藥為主要干預(yù)措施的臨床隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)，根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)按流程篩選形成納入文獻(xiàn)，

5、并提取納入文獻(xiàn)的基本信息及觀察指標(biāo)數(shù)據(jù)，同時(shí)按照Cochrane標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估文獻(xiàn)方法學(xué)質(zhì)量。對(duì)療效指標(biāo)進(jìn)行Meta分析，分析處理各指標(biāo)異質(zhì)性，并借助漏斗圖了解發(fā)表偏倚。
　　結(jié)果:
　　1.胃腸激素與DGP相關(guān)性的循證研究:共納入19個(gè)研究，受試者1433例。胃腸激素在DGP患者與健康人之間存在顯著差異，較健康人，DGP患者血漿MOT平均升高125.76 ng/L，GAS平均升高71.62 ng/L，而SS平均降低27.93 n

6、g/L。
　　2.基于胃腸激素疏肝健脾中藥治療DGP的系統(tǒng)評(píng)價(jià):共納入14個(gè)RCT，受試者1023例，納入研究的質(zhì)量普遍不佳。疏肝健脾中藥組能有效降低血漿MOT(P＜0.01)、增加胃排空率(P＜0.01)、提高總有效率及治愈率(P＜0.01）、降低FBG及PBG(P＜0.01)，且療效優(yōu)于西藥組，臨床安全性良好。
　　結(jié)論:
　　以MOT、GAS、SS為代表，DGP患者與健康人血漿胃腸激素水平存在顯著差異?！案斡羝⑷?/p>

7、”是DGP的重要病機(jī);基于MOT為代表的胃腸激素、胃排空功能等指標(biāo)，疏肝健脾中藥可安全有效地治療DGP。然而，受納入研究方法學(xué)質(zhì)量、異質(zhì)性等因素的限制，中藥對(duì)DGP的干預(yù)作用尚待更多大樣本、高質(zhì)量、多中心的臨床研究加以驗(yàn)證。
　　實(shí)驗(yàn)研究:
　　目的:
　　立足陽氣圓運(yùn)動(dòng)理論，探討降糖三黃片防治DGP的中醫(yī)學(xué)原理;并基于胃ICC及SCF/c-kit信號(hào)通路，借助多種現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)，從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)、分子生物學(xué)等

8、層面探討降糖三黃片對(duì)DGP大鼠的影響及作用機(jī)制，以進(jìn)一步拓寬降糖三黃片的應(yīng)用范圍，為DGP提供有效的治療選擇。
　　方法:
　　將70只雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分出10只大鼠作為正常組，予普通飼料喂養(yǎng)，剩下60只大鼠予高糖高脂飼料喂養(yǎng)。1月后，造模組大鼠以35 mg/kg劑量一次性腹腔注射STZ，對(duì)正常組大鼠以等量檸檬酸緩沖液腹腔注射。72 h后尾尖空腹血糖≥11.1 mmol/L伴糖尿病癥狀，判定為糖尿病成模。繼

9、續(xù)觀察2周，除去期間死亡及血糖恢復(fù)的大鼠，共成模49只。將成模大鼠進(jìn)一步隨機(jī)分為DGP模型組13只，降糖三黃片低劑量組（降低組）、降糖三黃片高劑量組（降高組）、半夏瀉心湯組各12只;降低組按0.781 g/kg灌服降糖三黃片藥液，降高組按1.563 g/kg灌服降糖三黃片藥液，半夏瀉心湯組按5.4 g/kg灌服半夏瀉心湯藥液，正常組、DGP模型組給予等量蒸餾水灌服。實(shí)施干預(yù)8周后，各組隨機(jī)抽取2只大鼠測(cè)胃排空，證實(shí)存在胃排空障礙，可判斷

10、為DGP造模成功。實(shí)驗(yàn)過程中觀察大鼠的一般情況，每隔2周測(cè)大鼠尾尖FBG，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)測(cè)FINS，計(jì)算Homa-IR，并測(cè)TC、TG、HDL-C、LDL-C等血脂指標(biāo);采用半固體糊胃內(nèi)殘留率法測(cè)試胃排空功能，透射電鏡下觀察胃ICC、平滑肌細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，免疫組化法觀察c-kit陽性ICC的數(shù)量，Western blotting法檢測(cè)胃竇c-kit蛋白的表達(dá)，RTQ-PCR法檢測(cè)胃竇SCF、c-kit mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:

11、r>　　1.糖代謝方面，較模型組，治療4周，降低組、降高組及半夏瀉心湯組FBG均有改善（P＜0.01）;治療8周，降低組、降高組對(duì)FBG仍有改善作用，但半夏瀉心湯組FBG回升，與模型組無差別(P＞0.05)。治療8周，較模型組，降低組、降高組能降低FINS及Homa-IR（P＜0.01），較半夏瀉心湯組有顯著差異（P＜0.01）;較模型組，半夏瀉心湯組不降低FINS（P＞0.05），但能降低Homa-IR（P＜0.05）。脂代謝方面，治

12、療8周，較模型組，降低組、降高組可降低TC、TG及LDL-C(P＜0.01)，但不能升高HDL-C（P＞0.05）;而半夏瀉心湯組對(duì)血脂指標(biāo)無明顯改善作用(P＞0.05)。胃排空功能方面，降低組、降高組及半夏瀉心湯組均可減少胃殘留率（P＜0.01），組間療效無顯著差別（P＞0.05）。對(duì)以上各指標(biāo)的影響，降低組、降高組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.電鏡下觀察胃ICC及平滑肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，較正常組，模型組ICC、平滑

13、肌細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)及細(xì)胞連接破壞明顯。降低組、降高組及半夏瀉心湯組均能修復(fù)ICC、平滑肌細(xì)胞損傷，各組修復(fù)作用相似。
　　3.c-kit陽性ICC免疫組化染色顯示，較正常組，模型組ICC明顯減少，分布稀疏，甚至缺如，著色較淡，陽性物IOD值顯著降低（P＜0.01）;降低組、降高組及半夏瀉心湯組均可增加ICC數(shù)量，上調(diào)陽性物IOD值(P＜0.01)。Western blotting法檢測(cè)c-kit蛋白表達(dá)顯示，較模型組，降低組、降高組及

14、半夏瀉心湯組可增加c-kit蛋白表達(dá)(P＜0.01)，各組促表達(dá)作用無顯著差別（P＞0.05）。
　　4.RTQ-PCR法檢測(cè)胃竇SCF、c-kit mRNA表達(dá)顯示，以正常組基因表達(dá)量為參照，模型組c-kit、SCF mRNA表達(dá)顯著降低(P＜0.01)。較模型組，降低組、降高組及半夏瀉心湯組均可促進(jìn)c-kit mRNA表達(dá)（P＜0.05），各組作用無顯著差別(P＞0.05)。降高組可促進(jìn)SCF mRNA表達(dá)(P＜0.05)，而

15、降低組對(duì)SCF mRNA表達(dá)的上調(diào)作用未顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.062);半夏瀉心湯組可明顯增加SCF mRNA表達(dá)（P＜0.01），且優(yōu)于降低組、降高組(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　基于陽氣圓運(yùn)動(dòng)理論及循證研究結(jié)論，以“肝郁脾弱”致“升降失調(diào)”再釋DGP病機(jī);降糖三黃片借“瀉熱通瘀，益氣養(yǎng)陰”之法行“調(diào)和升降”之用，而產(chǎn)生對(duì)DGP的防治作用。降糖三黃片可有效降低DGP大鼠空腹胰島素及胰島素抵抗指數(shù)，改善胰島素抵抗，降

16、低空腹血糖，同時(shí)糾正臘代謝異常，從而改善糖脂代謝紊亂;針對(duì)DGP相關(guān)的胃ICC損傷，降糖三黃片可增加胃竇平滑肌SCF mRNA的表達(dá)，同時(shí)增加c-kitmRNA及蛋白的表達(dá)，修復(fù)受損的SCF/c-kit信號(hào)通路，促進(jìn)ICC的發(fā)育、增殖、分化及表型維持等生物學(xué)行為，以增加ICC數(shù)量，修復(fù)ICC及平滑肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷，從而促進(jìn)胃慢波的產(chǎn)生及傳導(dǎo)，增強(qiáng)胃的起搏功能，實(shí)現(xiàn)促進(jìn)胃排空的防治作用。不同劑量組對(duì)比發(fā)現(xiàn)降糖三黃片對(duì)糖脂代謝及胃動(dòng)力的改