用DDRT-PCR技術(shù)篩選仔豬腹瀉抗性候選基因.pdf

1、該試驗以久仰香豬、劍白香豬和長白豬三個品種為材料,以品種間同一組織(胸腺、脾臟、小腸)不同的發(fā)病狀態(tài)為對照及久仰香豬小腸對大腸桿菌的不同粘附型為對照,RNA樣品混池后,采用3條錨定引物x7條隨機引物,共21個引物組合,硝酸銀顯色,進行差異顯示研究,篩選相關(guān)特異表達基因,并確定與仔豬腹瀉抗性有關(guān)的候選基因.在胸腺未發(fā)病池中檢測到網(wǎng)格相關(guān)蛋白、SOP2及HPK/GCK-LIKE KINASE(HGK)三條序列的特異表達.在胸腺發(fā)病池中檢測到

2、三條特異表達基因,其中兩條為新序列,一條為相似性較高的未知功能序列.胸腺未發(fā)病池中網(wǎng)格相關(guān)蛋白、SOP2及HGK的超量表達與胸腺作為機體中樞免疫器官的功能密切相關(guān).胸腺是淋巴細胞等免疫細胞發(fā)生、分化和成熟的場所.大腸桿菌致病產(chǎn)生的信號,導致肌動蛋白骨架結(jié)構(gòu)的重排.通過激酶級聯(lián)HGK→MEKKs→MKK4,MKK7→JNKs這一途徑,引發(fā)許多細胞效應,如細胞增殖、細胞轉(zhuǎn)換、分化和細胞程序性死亡.在T細胞的成熟和分化過程中涉及到大量的T細胞

3、膜受體分子的合成,轉(zhuǎn)運、CD3/TCR復合體的組裝、表面膜結(jié)合標志性蛋白CD4/CD8及大量的細胞程序性死亡.在脾臟未發(fā)病池中檢測到5條特異表達基因,其中三條為相似性較高的已知功能基因,一條為前B細胞克隆增強因子,序列比較顯示,該序列還與Nck轉(zhuǎn)導蛋白同源;另一條與長散布元件反轉(zhuǎn)錄酶同源;第三條與網(wǎng)格蛋白輕鏈A同源.一條為相似性性較高的未知功能序列.一條為新序列.在脾臟發(fā)病池中檢測到5條特異表達基因,其中一條為相似性較高的已知功能序列,

4、該基因與脯氨酰羧肽酶同源.兩條為相似性性較高的未知功能序列,兩條為新序列.脾臟是外周淋巴器官,是淋巴細胞接受抗原刺激產(chǎn)生免疫應答的場所.抗原通過胞吞作用到達溶酶體或到達內(nèi)區(qū),如MHC-Ⅱ;收MHC-Ⅱ?qū)⑵涮岢式oCD4+Th,進一步激發(fā)體液免疫反應.LINE-1反轉(zhuǎn)錄酶在細胞應激時(如病毒、細菌侵入,藥物等)自免疫疾病中發(fā)揮一定的作用.脾臟的另一功能區(qū)就是作為B細胞成熟部位的生發(fā)中心.B細胞前體增強因子在外周淋巴組織中的B細胞增殖和成熟為

5、漿細胞和記憶細胞具一定作用.作為信號轉(zhuǎn)導蛋白,Nck通過活化免疫細胞,在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮作用.脯氨酸羧肽酶在脾臟發(fā)病池中的特異表達與仔豬腹瀉的關(guān)系還不能得到解釋.在小腸未發(fā)病池中只檢測到一條新序列的特異表達.在小腸發(fā)病池中檢測到5條特異表達基因,其中一條與網(wǎng)格蛋白輕鏈A同源,一條為相似性性較高的未知功能序列,其余四條為新序列.小腸發(fā)病池中網(wǎng)格蛋白輕鏈A的超量表達,在網(wǎng)格蛋白運輸外界抗原中起重要作用.在久仰香豬小腸對大腸桿菌的不同粘附型為對