曲克蘆丁對糖尿病大鼠認(rèn)知功能障礙及海馬NAD(P)H-醌氧化物還原酶1的影響.pdf

1、目的：糖尿病認(rèn)知功能障礙為血糖異常引起的學(xué)習(xí)、記憶、計算等認(rèn)知能力的損害，其中糖尿病導(dǎo)致的氧化應(yīng)激與抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)之間的失衡參與了疾病的發(fā)生、發(fā)展過程。酶類抗氧化系統(tǒng)中NAD(P)H：醌氧化物還原酶1(NQO1)為黃素類蛋白酶，亦為保護(hù)性還原酶，當(dāng)機(jī)體受到氧化應(yīng)激刺激時，NQO1表達(dá)增多，從而增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力。本實驗重點(diǎn)觀察糖尿病大鼠出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙時海馬中NQO1的變化以及具有抗氧化作用的中藥曲克蘆丁對糖尿病認(rèn)知功能障礙的影響。<

2、br>　　方法：雄性Sprague Dawley(SD)大鼠70只，體重150-170g，隨機(jī)分為正常對照組(NC組，n=10)，糖尿病組(DM組，n=60)，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，禁食12小時后，DM組大鼠腹腔內(nèi)一次性注射1％鏈脲佐菌素(STZ)60mg/kg，NC組大鼠腹腔內(nèi)一次性注射等體積檸檬酸緩沖液，72小時尾靜脈取血測定血糖，≥16.7mmol/L為造模成功，后每周測血糖，若<16.7mmol/L則剔除。造模成功后分別于第1

3、周、12周時對NC組、DM組大鼠進(jìn)行Morris水迷宮測試，第12周水迷宮測試結(jié)束后將DM組大鼠隨機(jī)分為糖尿病對照組(DC組，n=15)、糖尿病鹽水組(DN組，n=15)、曲克蘆丁干預(yù)組(DT組，n=15)、α-硫辛酸干預(yù)組(DL組，n=15)，第13周時D1、組大鼠給予腹腔注射曲克蘆丁60mg.kg-1.day-1，DL組大鼠給予腹腔注射僅α-硫辛酸注射液60mg.kg-1.day-1，DN組、NC組各給予等體積生理鹽水，干預(yù)6周，第

4、18周時各組行Morris水迷宮測試后，處死大鼠取海馬，應(yīng)用實時熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)法(Real-time PCR)及蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western-blot)分別檢測海馬中NQO1mRNA和蛋白的表達(dá)水平，同時采用黃嘌呤氧化酶法測定海馬中超氧化物歧化酶(SOD)活力，硫代巴比妥法測定海馬中丙二醛(MDA)含量。
　　所得數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包處理，應(yīng)用重復(fù)測量方差分析、多元方差分析及完全隨機(jī)設(shè)計的單因素方差分析

5、統(tǒng)計數(shù)據(jù)，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示統(tǒng)計結(jié)果，p<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.一般觀察
　　糖尿病組大鼠于造模成功后出現(xiàn)明顯的多尿、多飲、多食、體重下降，隨著實驗的進(jìn)行，糖尿病大鼠血糖波動于較高水平(>20.0mmol/L)，同時出現(xiàn)毛色枯黃、皮膚變薄、精神萎靡、易激惹現(xiàn)象。干預(yù)過程中DT組大鼠一般情況優(yōu)于DL組。正常對照組大鼠生長狀態(tài)及營養(yǎng)情況良好，無上述糖尿病癥狀。
　　2.血糖及體重的變化造模

6、前DM組與NC組相比，大鼠的血糖及體重均無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)，干預(yù)結(jié)束時(第18周)，DC組(28.29±2.79)、DN組(29.25±3.18)、DT組(27.77±2.66)、DL組(30.54±3.31)大鼠血糖均明顯高于NC組(7.63±0.77，p<0.01)，但體重均明顯低于NC組大鼠同期體重(p<0.01)。干預(yù)結(jié)束時，糖尿病組各亞組間(DC、DN、DT、DL)大鼠血糖及體重均無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)。

7、>　　3.Morris水迷宮測試結(jié)果第1周時Morris水迷宮測試結(jié)果顯示：與NC組相比，DM組大鼠逃避潛伏期無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)，說明兩組大鼠認(rèn)知功能無差異。
　　第12周干預(yù)結(jié)束時Morris水迷宮測試結(jié)果顯示：與NC組相比，DM組大鼠逃避潛伏期明顯延長(p<0.05)，在相同時間點(diǎn)兩組逃避潛伏期有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05)，證明第12周時糖尿病大鼠出現(xiàn)了認(rèn)知功能障礙。
　　第18周干預(yù)結(jié)束后水迷宮測試結(jié)果顯示：

8、與NC組相比，DC、DN、DT、DL組大鼠逃避潛伏期均延長(p<0.05)；與DC/DN組相比，DT、DL組大鼠逃避潛伏期均顯著縮短(p<0.05)；DT組與DL組相比，DC組與DN組相比，大鼠逃避潛伏期均無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)。
　　4.海馬中NQO1mRNA的表達(dá)Real-time PCR顯示：與NC組(1.00±0.00)相比，DC組(0.70±0.04)DN組(0.72±0.08)大鼠海馬中NQO1mRNA表達(dá)量明顯

9、減少(p<0.05)；與DC/DN組相比，DT組(1.18±0.09)、DL組(1.13±0.05)大鼠海馬中NQO1mRNA表達(dá)量均明顯增加(p<0.05)；DT組與DL組相比，DN組與DC組相比，海馬中NQO1mRNA表達(dá)量均無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)。
　　5.海馬中NQO1蛋白的表達(dá)Western-blot顯示：與NC組(1.00±0.00)相比，DC組(0.44±0.05)、DN組(0.44±0.04)大鼠海馬中NQO

10、1蛋白表達(dá)量明顯減少(p<0.01)；與DC/DN組相比，DT組(1.14±0.05)、DL組(1.19±0.05)大鼠海馬中NQO1蛋白表達(dá)量明顯增加(p<0.01)；DT組與DL組相比，DN組與DC組相比，大鼠海馬中NQO1蛋白表達(dá)量均無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)。
　　6.海馬中SOD活力及MDA含量的測定與NC組(SOD：115.98±7.57 MDA：2.74±0.21)相比，DC組(SOD：61.81±3.94 MDA

11、：3.83±0.11)、DN組(SOD：68.24±7.62MDA：3.71±0.20)大鼠海馬中SOD活力明顯降低(p<0.01)，MDA含量明顯增多(p<0.01)；與DC/DN組相比，DT組(SOD：191.99±11.41 MDA：2.53±0.20)、DL組(SOD：200.32±6.17 MDA：2.02±0.23)大鼠海馬中SOD活力均增強(qiáng)(p<0.01)，MDA含量均明顯減少(p<0.01)；DT組與DL組相比，大鼠海馬

12、中SOD活力無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)，但DT組中MDA含量比DL組增多(p<0.05)；DN組與DC組相比，大鼠SOD活力及MDA含量均無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.糖尿病可導(dǎo)致大鼠認(rèn)知功能障礙，減少海馬中具有抗氧化能力的NQO1的表達(dá)，降低SOD活性，增加氧化應(yīng)激產(chǎn)物MDA的產(chǎn)生。
　　2.α-硫辛酸可改善糖尿病認(rèn)知功能障礙，增加海馬中NQO1的表達(dá)，增強(qiáng)SOD活性，減少M(fèi)DA的產(chǎn)生。