林蔭銀蓮花多倍體種質(zhì)培育和離體快繁研究.pdf

1、林蔭銀蓮花(Anemone flaccida Fr.Schmidt)屬銀蓮花屬(Anemone),以其干燥根莖入藥,俗稱地烏,具有祛風(fēng)濕、助筋骨、消腫止痛等功效,開(kāi)發(fā)意義巨大。在自然條件下林蔭銀蓮花生長(zhǎng)期短,生物量小,種子發(fā)芽困難,野生資源有限,急需實(shí)現(xiàn)人工栽培。本研究針對(duì)其種質(zhì)資源缺乏的問(wèn)題,以無(wú)菌苗葉片為外植體建立了離體葉的再生體系,并初步探討了多倍體種質(zhì)培育的方法。主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)以根莖上萌發(fā)的芽為材料,用

2、不同濃度秋水仙素(colchicine)作為誘導(dǎo)劑,采用棉球包裹處理,然后栽培到土壤中觀察形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果表明,以0.2％濃度秋水仙素處理根莖萌發(fā)芽8d的誘導(dǎo)率最高,達(dá)81.67％,且死亡率低,是誘導(dǎo)多倍體材料的可行方法。
　　 (2)以根莖萌發(fā)芽為材料,消毒后在MS+2.0 mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+0.8％瓊脂+3％蔗糖培養(yǎng)基上培養(yǎng),然后轉(zhuǎn)移到MS+1.0 mg/L6-BA+0.3 mg/L NAA+0.5

3、mg/L KT+3％蔗糖+0.8％瓊脂培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng),再以不同濃度秋水仙素采用點(diǎn)滴法和浸泡法處理再生芽。結(jié)果表明,多倍體誘導(dǎo)率很低,最高誘變率僅達(dá)13％左右,且死亡率高,最高達(dá)81.7％。
　　 (3)再生芽離體葉片在添加不同濃度組合的細(xì)胞分裂素類物質(zhì)6-BA與生長(zhǎng)素類NAA的MS基本培養(yǎng)基上,并在光照和黑暗兩種條件下培養(yǎng),觀察對(duì)外植體誘導(dǎo)、分化的影響。結(jié)果表明,在所有處理中均無(wú)愈傷組織產(chǎn)生,而是直接從葉片外植體上再生小芽；以

4、在MS+1.5 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA+0.8％瓊脂+3％蔗糖培養(yǎng)基上黑暗條件下培養(yǎng)的再生芽誘導(dǎo)率最高,達(dá)21.67％。光照雖對(duì)葉片外植體再生芽的誘導(dǎo)有一定影響,但對(duì)再生小芽數(shù)目影響不大。
　　 (4)以添加不同濃度組合的2,4-D與6-BA的MS為培養(yǎng)基,并在黑暗和光照兩種條件下培養(yǎng),結(jié)果顯示,葉片外植體仍未被誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織,而是直接再生出小芽；在黑暗條件下,以MS+2.5 mg/L6-BA+0.2 mg

5、/L2,4-D+0.8％瓊脂+3％蔗糖培養(yǎng)基的再生芽誘導(dǎo)率最高,可達(dá)28.33％;有光照條件下,再生芽誘導(dǎo)率略低,但對(duì)單個(gè)葉片外植體上再生芽數(shù)影響不大。
　　 (5)在MS基本培養(yǎng)基中添加0.1 mg/L2,4-D和0.1 mg/L NAA與不同濃度6-BA組合,并在黑暗和光照兩種條件下培養(yǎng)葉片外植體,結(jié)果表明,在黑暗條件下,以MS+1.5 mg/L6-BA+0.1 mg/L2,4-D+0.1 mg/L NAA+0.8％瓊脂+3

6、％蔗糖為培養(yǎng)基的再生芽誘導(dǎo)率最高,可達(dá)32.78％,是目前葉片再生芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基。光照對(duì)初代再生芽的誘導(dǎo)仍有影響,但對(duì)再生小芽數(shù)量影響不大。
　　 (6)將葉片再生小芽繼代培養(yǎng)4次后,去除叢生芽上的大葉片,保留新生葉,接種到1/2MS+1.0 mg/L NAA+0.8％瓊脂-4-3％蔗糖的生根培養(yǎng)基中,分別在室溫(19±2℃)光照、室溫(19±2℃)黑暗及4℃黑暗下培養(yǎng)。結(jié)果表明,在4℃黑暗下培養(yǎng)生根率最高,可達(dá)70％。待根