惡性血液病合并侵襲性真菌感染的分子生物學鑒定及藥物敏感性研究.pdf

1、目的：
　　 1.鑒于惡性血液病真菌感染日趨嚴重，探討惡性血液病合并真菌感染的分子生物學診斷方法，以達到對真菌感染的早期診斷的目的。
　　 2.隨著抗真菌藥物的廣泛使用，耐藥菌株逐漸增多，對菌株進行藥敏實驗，檢測對常用抗真菌藥物的敏感性。
　　 方法：
　　 1.采取患者靜脈血進行常規(guī)血液培養(yǎng)；對血培養(yǎng)陽性樣本進行菌株鑒定，并鑒定到種；使用改良的真菌DNA 提取法進行基因提??；使用通用引物ITS1和ITS

2、4 進行基因擴增；使用MspI 酶對擴增產(chǎn)物進行酶切鑒定；對擴增產(chǎn)物進行測序，所得序列與Genbank核酸庫已登錄的序列進行BLAST 比對。
　　 2.使用ATB FUNGUS3 試條進行藥敏試驗?？拐婢幬铮簝尚悦顾谺（AMB）、5-氟胞嘧啶（5-FC）、氟康唑（FCA）、伊曲康唑（ITR）和伏立康唑（VRC）。
　　 結果：
　　 1.在500人份可疑真菌感染的全血標本中，共檢出陽性樣本115 份。酶切鑒定

3、結果為白色念珠菌48株(41.7％)，熱帶念珠菌27株(23.5％)，光滑念珠菌16株(13.9％)、克柔念珠菌11株(9.6％)、近平滑念珠菌8株(7.0％)、其他5株(4.3％)。與血培養(yǎng)分離鑒定結果基本一致。
　　 2.擴增產(chǎn)物經(jīng)序列比對后發(fā)現(xiàn)，與酶切結果完全一致。PCR-RFLP 檢測和鑒定結果與血培養(yǎng)法有較好的一致性，但是統(tǒng)計學上無意義（p>0.05）。
　　 3.真菌主要為白色念珠菌，占41.7％。體外抗真菌

4、藥敏試驗對兩性霉素B（AMB）、5-氟胞嘧啶（5-FC）、氟康唑（FCA）、伊曲康唑（ITR）和伏立康唑（VRC）平均敏感率分別100％、97.22％、68.50％、77.78％和81.48％。其中對兩性霉素B、5-氟胞嘧啶敏感性最好，耐藥率分別為0％和2.78％。對氟康唑的敏感性最差，耐藥率為31.50％。
　　 結論：
　　 1.使用PCR-RFLP 進行菌株鑒定的技術敏感性、特異性高，與常規(guī)血培養(yǎng)方法比較耗時短，可