基于黃酮自組裝膠束模擬形成-增溶-促吸收機(jī)制的羊脂油炙淫羊藿機(jī)理研究.pdf

1、淫羊藿為傳統(tǒng)的補(bǔ)益類中藥，最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其含有的主要成分為淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ等黃酮類成分。淫羊藿具有強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕，補(bǔ)腎陽的功效。臨床常用羊脂油炮制淫羊藿，可增加療效。對于淫羊藿炮制的研究，本課題組在之前的研究中，分別從中藥活性成分吸收和代謝角度，揭示了“加熱”在淫羊藿炮制過程中對淫羊藿活性成分的影響，揭示了淫羊藿炮制過程中“熱”的作用與科學(xué)內(nèi)涵。然而羊脂油炙淫羊藿炮制過程中另一關(guān)鍵因素——“輔料羊脂油”的作用還未進(jìn)行深入研

2、究。因此，采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)對炮制輔料羊脂油進(jìn)行深入研究，對揭示油炙的科學(xué)內(nèi)涵，闡明羊脂油增效機(jī)制的研究具有重要意義。
　　前期研究表明，淫羊藿經(jīng)炮制加熱后，其主要黃酮類成分更多的轉(zhuǎn)化成了易于吸收的活性黃酮。深入研究表明，由于活性黃酮類成分的增加，其在血液中的藥物濃度與也有所增加并最終表現(xiàn)為生物利用度的提高。此外，相關(guān)文獻(xiàn)研究表明羊脂油主要成分為具有脂肪長鏈和表面活性的脂肪酸類成分，此類表面活性劑可以和膽酸鹽作用形成混合膠束作為藥物

3、載體，促進(jìn)藥物吸收。而課題組前期研究發(fā)現(xiàn)淫羊藿主要活性黃酮類成分在羊脂油的作用下，在人工胃腸液中可以自組裝形成粒徑較小的膠束。因此基于以上研究發(fā)現(xiàn)提出假說:羊脂油可與人體內(nèi)的天然生物表面活性劑膽酸鹽共同作用，促使淫羊藿黃酮類成分自組裝形成膠束，增加藥物溶解度，改善藥物吸收，最終達(dá)到增效作用。本文將從以下幾方面對該假設(shè)進(jìn)行研究論證。
　　(1)通過模擬人體內(nèi)環(huán)境，研究在羊脂油的作用下淫羊藿活性黃酮及淫羊藿總黃酮膠束的自組裝形成，結(jié)果

4、表明形成了類球形且表面光滑的呈分散狀態(tài)的膠束。研究了不同部位、產(chǎn)地、來源的羊脂油以及羊脂油中的主要成分對膠束形成的影響。研究結(jié)果為進(jìn)一步研究羊脂油作為炮制輔料的增效作用，促進(jìn)淫羊藿黃酮的吸收奠定了基礎(chǔ)。
　　(2)考察淫羊藿活性黃酮及淫羊藿總黃酮及其在羊脂油的作用下自組裝形成膠束后的平衡溶解度，結(jié)果表明形成膠束后，淫羊藿活性黃酮及淫羊藿總黃酮平衡溶解度顯著增加;采用大鼠在體單向腸灌流模型和Caco-2細(xì)胞模型對比研究了淫羊藿活性黃

5、酮和淫羊藿總黃酮及其自組裝形成膠束后的腸吸收滲透性差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:Caco-2細(xì)胞模型中淫羊藿活性黃酮和淫羊藿總黃酮加入羊脂油自組裝形成膠束后，吸收滲透系數(shù)顯著提高，外排比率(PBA/PAB)下降。大鼠在體單向腸灌流模型中，加入羊脂油自組裝形成膠束后:淫羊藿苷在十二指腸、空腸、結(jié)腸段的腸壁表觀滲透系數(shù)與不加羊脂油相比顯著增加，寶藿苷Ⅰ在十二指腸、空腸段腸壁表觀滲透系數(shù)顯著增加，淫羊藿總黃酮中的淫羊藿苷成分在十二指腸、空腸段的表觀滲透

6、系數(shù)顯著增加。結(jié)果證實(shí)，淫羊藿活性黃酮和淫羊藿總黃酮自組裝形成膠束后腸道吸收增加。
　　(3)采用藥理效應(yīng)法對比研究了淫羊藿總黃酮及其在羊脂油作用下自組裝形成膠束后的藥動學(xué)參數(shù)，選擇氫化可的松腎陽虛模型，以SOD和MDA為檢測指標(biāo)，建立體存生物相當(dāng)藥量-時(shí)間關(guān)系，并最終得到藥動學(xué)參數(shù)。采用HPLC-ESI-MS方法對淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ及其自組裝膠束在體內(nèi)吸收后不同時(shí)間點(diǎn)的藥物濃度進(jìn)行分析測定。結(jié)果表明淫羊藿活性黃酮和淫羊藿總黃酮自

7、組裝形成膠束后，其在動物體內(nèi)的AUC(0-t)，AUC(0-∞)，Cmax與原形藥物相比均顯著提高，淫羊藿活性黃酮和淫羊藿總黃酮生物利用度提高，體內(nèi)吸收增加，進(jìn)一步闡釋了炮制輔料羊脂油增強(qiáng)淫羊藿溫腎助陽作用的機(jī)制。
　　(4)注射氫化可的松造“腎陽虛”證大鼠模型，考察大鼠體征、體重、體溫以及大鼠睪丸、下丘腦-垂體-腎上腺-胸腺軸病理切片，采用ELISA方法測定大鼠血清睪酮和皮質(zhì)酮含量。結(jié)果表明各給藥組大鼠相對于陰性對照組，體重有不

8、同程度的下降，精神狀態(tài)略差，自主活動次數(shù)減少。淫羊藿活性黃酮和淫羊藿總黃酮自組裝形成膠束后，血清睪酮和皮質(zhì)酮含量均有不同程度提高，對大鼠下丘腦-垂體-腎上腺-胸腺軸和大鼠睪丸病理切片形態(tài)也有一定改善。結(jié)果闡明了羊脂油對淫羊藿活性黃酮和淫羊藿總黃酮溫腎助陽作用的增效作用和機(jī)制。
　　綜上，本文模擬了淫羊藿活性黃酮和淫羊藿總黃酮自組裝膠束的形成，從整體動物、組織、細(xì)胞等不同水平，多層次研究了羊脂油對淫羊藿活性黃酮溫腎助陽作用的增效作用