UbiquitinB在HDAC抑制劑選擇性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡中的機(jī)制研究.pdf

1、研究背景
　　 組蛋白去乙?；福℉istone Deacetylases，HDACs）抑制劑是一類(lèi)新型抗腫瘤藥物，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞中具有抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡和分化的作用。目前，全球有超過(guò)100個(gè)關(guān)于HDAC抑制劑的臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行，并已取得令人振奮的結(jié)果，顯示了該藥良好的臨床應(yīng)用前景。2006年，美國(guó)食品與藥品管理局（FDA）正式批準(zhǔn)第一個(gè)HDAC抑制劑——Zolinza膠囊（Vorinostat）上市，用于治療皮膚T細(xì)胞淋巴瘤。

2、然而，關(guān)于HDAC抑制劑作用機(jī)制的研究還相對(duì)落后，目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)HDAC抑制劑特異性抗腫瘤效應(yīng)的作用靶點(diǎn)的認(rèn)識(shí)仍不十分明確，近年來(lái)，雖然有一些研究報(bào)道了HDAC抑制劑相關(guān)的效應(yīng)分子，但并不能建立相關(guān)靶點(diǎn)與HDAC抑制劑選擇性殺滅腫瘤細(xì)胞效應(yīng)間的必然邏輯聯(lián)系。因此，系統(tǒng)的篩選HDAC抑制劑的作用靶點(diǎn)，不僅有助于闡明HDAC抑制劑選擇性抗腫瘤效應(yīng)的機(jī)制，還對(duì)進(jìn)一步發(fā)展腫瘤靶向性藥物的研究具有重要意義。
　　 目的
　　 通過(guò)

3、構(gòu)建SMART（Suppression of Mortality by Antisense Rescue Technique）文庫(kù)，以功能效應(yīng)為基礎(chǔ)篩選HDAC抑制劑的作用靶點(diǎn)，闡明HDAC抑制劑選擇性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的新機(jī)制。
　　 方法
　　 建立Trichostatin A選擇性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡模型，構(gòu)建MCF-7細(xì)胞經(jīng)HDAC抑制劑——Trichostatin A誘導(dǎo)表達(dá)反義cDNA文庫(kù)，篩選凋亡效應(yīng)基因，結(jié)合生

4、物信息學(xué)分析，確定相應(yīng)的靶點(diǎn)進(jìn)行深入機(jī)制研究。
　　 結(jié)果
　　 成功構(gòu)建了Trichostatin A選擇性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞反義cDNA文庫(kù)，經(jīng)過(guò)兩輪嚴(yán)格藥物篩選后，共獲得了24個(gè)候選靶基因。通過(guò)對(duì)Ubiquitin B基因進(jìn)行深入機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)：Ubiquitin B在腫瘤細(xì)胞中可以被Trichostatin A選擇性誘導(dǎo)表達(dá)升高，Trichostatin A可以引起腫瘤細(xì)胞線粒體膜上BCL-2家族抗凋亡蛋白BCL-2和M

5、CL-1的泛素化降解，改變線粒體膜電位，啟動(dòng)細(xì)胞線粒體凋亡途徑，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡；反義封閉Ubiquitin B可以抵抗Trichostatin A的凋亡誘導(dǎo)作用。另一類(lèi)HDAC抑制劑——Apicidine，也與Trichostatin A具有相同的作用；此外，Trichostatin A還可以引起白血病細(xì)胞K562中融合蛋白BCR/ABL發(fā)生泛素化降解。
　　 結(jié)論
　　 SMART技術(shù)作為一種基于功能效應(yīng)的高通量