sfrp3表達(dá)下調(diào)對小鼠牙齒發(fā)育的影響.pdf

1、器官發(fā)育的形態(tài)發(fā)生過程中，Wnt家族信號是調(diào)節(jié)上皮和間充質(zhì)之間相互作用的重要生長因子之一，在果蠅(Drosophila)和秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditis elegans)的遺傳化學(xué)研究，非洲蟾蜍(Xenopus)的異位基因表達(dá)研究和小鼠的基因敲除實驗中都證明了Wnt家族與胚胎的分節(jié)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)的圖示形成(CNS patterning)和細(xì)胞不對稱分化的調(diào)控有關(guān)。Wnt信號系統(tǒng)也是調(diào)節(jié)牙齒發(fā)育的四大類生長因子之一，sFRP(

2、secreted Fizzled-related protein)是Wnt信號的調(diào)控因子，本論文通過抑制sfrp3的表達(dá)，研究Wnt信號在牙齒發(fā)育過程中所起的作用。利用RNAi技術(shù)和慢病毒轉(zhuǎn)基因技術(shù)，設(shè)計針對sfrp3的siRNA，構(gòu)建表達(dá)shRNA的pNL-EGFP-U6-shsfrp3-Ⅰ和pNL-EGFP-U<,6>-shsfrp3-Ⅱ質(zhì)粒，使它們分別和pVSVG,pHelper組成慢病毒三質(zhì)粒轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，再共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，生產(chǎn)

3、EGFP-shsfrp3-I病毒和EGFP-shsfrp3-Ⅱ病毒。用EGFP-shsfrp3-Ⅰ病毒和EGFP-shsfirp3-Ⅱ病毒分別感染牙間充質(zhì)細(xì)胞，通過Realtime RT-PCR方法檢測各個組織的sfrp3的相對表達(dá)量，篩選出抑制效率為63％的EGFP-shspp3-Ⅱ病毒應(yīng)用于研究牙齒發(fā)育。實驗結(jié)果是：感染EGFP-shsJhp3-Ⅱ病毒的重組牙胚(E13．5牙間充質(zhì)+E10.5牙上皮)的成牙率降低。感染EGFP—sh