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文檔簡介
1、目的:
程序性死亡是正常生理和病理情況下的一個(gè)基本過程。焦亡是一種caspase-1(Cysteine-requiring Aspartate Protease-1,半胱氨酸天冬氨酸酶-1)依賴的細(xì)胞程序性死亡。焦亡由炎癥小體如NLRP3炎癥小體介導(dǎo),促發(fā)許多病理性因素,如卒中、癌癥、心肌梗死等。NLRP3炎性小體增加炎癥反應(yīng),參與許多炎癥性疾病,如動(dòng)脈粥樣硬化。很多研究將caspase-1依賴的細(xì)胞死亡和ox-LDL(oxy
2、genizedlow density lipoprotein,氧化型低密度脂蛋白)及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定性聯(lián)cx系在一起。MCC950是新近發(fā)現(xiàn)的特異性NLRP3抑制劑,可特異性的抑制NLRP3炎癥小體的激活,進(jìn)一步抑制caspase-1的激活及IL-1β的分泌。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示MCC950可減輕EAE(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠模型的病變嚴(yán)重程度,對CAPS(Cry
3、opyrin-Associated Auto-inflammatory,CAPS)模型小鼠也有效。
因此我們推測,MCC950可能有助于減輕動(dòng)脈粥樣硬化。首先我們將觀察動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵因素ox-LDL,是否可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡焦亡,接下來,我們將研究mcc950對內(nèi)皮細(xì)胞焦亡的影響。
方法:
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC),從AT
4、CC公司獲得,HUVEC培養(yǎng)方法參照ATCC建議。酶法測定細(xì)胞上清液乳酸脫氫酶釋放,Hoechst33342和碘化丙啶雙染評價(jià)細(xì)胞膜完整性,TUNEL染色檢驗(yàn)DNA完整性,Western Blot法檢驗(yàn)caspase-1活性。
結(jié)果:
LDH釋放檢測結(jié)果顯示:ox-LDL處理后細(xì)胞LDH釋放水平明顯增加,加用MCC950處理后可顯著抑制ox-LDL誘導(dǎo)的LDH釋放,其抑制效果與caspase-1特異性抑制劑VX765
5、相似。
Hoechst33342/碘化丙啶雙染結(jié)果顯示:ox-LDL組細(xì)胞碘化丙啶染色陽性比率顯著高于對照組。MCC950+ox-LDL組和VX765+ox-LDL組碘化丙啶染色陽性率均顯著低于單獨(dú)ox-LDL處理組。MCC950+ox-LDL組和VX765+ox-LDL兩組之間無顯著差異。
TUNEL染色結(jié)果顯示:ox-LDL組細(xì)胞TUNEL染色陽性比率顯著高于對照組。MCC950+ox-LDL組和VX765+ox
6、-LDL組TUNEL染色陽性率均顯著低于單獨(dú)ox-LDL處理組,MCC950+ox-LDL組和VX765+ox-LDL組之間無顯著差異。
Western blot分析顯示:ox-LDL組激活形式的caspase-1表達(dá)顯著高于對照組。MCC950+ox-LDL組和VX765+ox-LDL組激活形式的caspase-1表達(dá)顯著低于單獨(dú)ox-LDL處理組。MCC950+ox-LDL組與VX765+ox-LDL組之間無顯著差異。
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