高糖誘導(dǎo)系膜細(xì)胞表達(dá)TNF-α及IL-6的機(jī)制探討.pdf

1、目的：觀察高糖培養(yǎng)腎小球系膜細(xì)胞內(nèi)TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)以及p38MAPK特異性抑制劑、NF-κB特異性抑制劑對(duì)高糖培養(yǎng)系膜細(xì)胞內(nèi)TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)的影響，研究p38MAPK、NF-κB激活途徑是否介導(dǎo)高糖環(huán)境下系膜細(xì)胞內(nèi)TNF-α及IL-6的表達(dá)，初步探討糖尿病腎病時(shí)高糖誘導(dǎo)系膜細(xì)胞促炎因子表達(dá)的機(jī)制。
　　 方法：1.不同濃度葡萄糖干預(yù)體外培養(yǎng)系膜細(xì)胞，以western blotting方法檢測(cè)磷

2、酸化p38MAPK蛋白表達(dá)，細(xì)胞免疫熒光方法檢測(cè)NF-κBp65蛋白的表達(dá)，RT－PCR方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TNF-α、IL-6 mRNA的表達(dá)，觀察不同濃度葡萄糖刺激對(duì)系膜細(xì)胞內(nèi)p38MAPK、NF-κB活性及TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)的影響。2.分別用p38MAPK特異性抑制劑、NF-κB特異性抑制劑干預(yù)體外高糖培養(yǎng)系膜細(xì)胞，檢測(cè)TNF-α、IL-6 mRNA的表達(dá)，磷酸化p38MAPK蛋白及NF-κBp65蛋白的表達(dá)，檢測(cè)方法同

3、上，觀察抑制p38MAPK、NF-κB活性后系膜細(xì)胞內(nèi)TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：1.隨著體外培養(yǎng)干預(yù)葡萄糖濃度增加，TNF-αmRNA表達(dá)逐漸升高，具有濃度依賴性；干預(yù)葡萄糖濃度在5.6～20mM時(shí)，IL-6 mRNA表達(dá)逐漸升高，具有濃度依賴性，但當(dāng)干預(yù)葡萄糖濃度達(dá)到25mM時(shí)，IL-6 mRNA表達(dá)反而下降；隨著體外培養(yǎng)干預(yù)葡萄糖濃度增加，磷酸化p38MAPK蛋白表達(dá)逐漸升高，具有濃度依賴性；隨

4、著體外培養(yǎng)干預(yù)葡萄糖濃度增加，NF-κBp65在胞核表達(dá)逐漸增多，胞漿表達(dá)逐漸減少，具有濃度依賴性。2. SB203580可明顯抑制p38MAPK蛋白活性，同時(shí)使高糖培養(yǎng)系膜細(xì)胞內(nèi)TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)下降；PDTC可明顯抑制NF-κB活性，同時(shí)使高糖培養(yǎng)系膜細(xì)胞TNF-α及IL-6 mRNA表達(dá)下降；同時(shí)抑制p38MAPK及NF-κB活性，高糖培養(yǎng)系膜細(xì)胞TNF-α及IL-6 mRNA表達(dá)下降更加明顯。
　　 結(jié)論