2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、糖皮質(zhì)激素(Glucocorticoid,GC)可發(fā)揮非特異性抗炎、抗毒、抗休克及其免疫抑制等藥理學(xué)效應(yīng),因而被廣泛用作炎癥、器官移植、自身免疫疾病及腫瘤治療等領(lǐng)域。但是作為其主要副作用之一的糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松癥(glucocorticoid-induced osteoporosis,GIO)的發(fā)病率卻逐年升高,成為了臨床上迫切需要解決的難題。作為最為常見的繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥,GIO是一種以骨量減少、骨組織微結(jié)構(gòu)破壞、骨密度減低、骨的脆

2、性增加并且骨折風(fēng)險性升高為特征的代謝性骨病,GIO的發(fā)病機制及其防治也越來越受到關(guān)注。長期大劑量應(yīng)用GC后,成骨細(xì)胞的增殖受到抑制,成骨細(xì)胞和骨細(xì)胞的凋亡數(shù)量增加,最終導(dǎo)致成骨細(xì)胞的骨形成能力下降;GC還可使破骨細(xì)胞的生成增多,增加破骨細(xì)胞的數(shù)目,同時增強其活性,促進破骨細(xì)胞性骨吸收,進而導(dǎo)致骨量丟失,造成骨質(zhì)疏松的發(fā)生。基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是一類高度保守的蛋白水解酶,由鋅離子依

3、賴性酶組成,可降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的大多數(shù)蛋白質(zhì),從而參與組織再造和器官形成。MMPs通過參與骨改建過程,在骨組織的新陳代謝活動中發(fā)揮著極其重要的作用,同時其基因表達、蛋白質(zhì)合成及表達均受到多種生長因子、細(xì)胞因子及激素等因素不同程度的調(diào)節(jié)。因此,對MMPs的研究可以為骨質(zhì)疏松的治療提供一定的理論依據(jù)及新的思路。
  目的:
  本課題通過檢測GIO小鼠骨組織中MMP-2、9、13表達水平的變化及其在體外給予GC后檢測骨樣細(xì)

4、胞中MMP-2、13mRNA的表達變化,探討MMPs表達異常與GIO的關(guān)系,為GIO的預(yù)防和治療方案的選擇提供一定的理論依據(jù)。
  方法:
  第一階段:本實驗選用SPF級7周齡昆明小鼠(20只),隨機分為實驗組和對照組。在適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后,實驗組小鼠經(jīng)灌胃給予氫化潑尼松(15mg/kg),隔日給藥1次;對照組給予等量PBS。2周后行4%多聚甲醛經(jīng)心臟內(nèi)灌注固定處死小鼠,取脛骨進行常規(guī)固定、脫鈣、石蠟包埋、切片,通過HE染色

5、觀察組織學(xué)改變;進行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和組織蛋白酶K(CK)的免疫組織化學(xué)染色觀察破骨細(xì)胞數(shù)量、分布及活性;采用免疫組織化學(xué)方法檢測骨組織中SOST、DMP-1、MMP-2、MMP-9、MMP-13的表達;并對上述結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。第二階段:我們通過體外培養(yǎng)小鼠MLO-Y4骨樣細(xì)胞系,并給予不同濃度(10-6M,10-7M,10-8M)的地塞米松(Dex)進行干預(yù)。采用MTT法檢測細(xì)胞增殖;采用實時定量熒光逆轉(zhuǎn)錄聚合酶

6、鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測骨樣細(xì)胞中MMP-2、MMP-13mRNA的表達。
  結(jié)果:
  第一階段:
  1.骨小梁:相比對照組,實驗組小鼠①脛骨松質(zhì)骨區(qū)域骨量(BV/TV)明顯減少,生長板變薄,皮質(zhì)骨變窄;②脛骨松質(zhì)骨中TRAP(抗酒石酸酸性磷酸酶)染色陽性破骨細(xì)胞明顯增多,且CK免疫組織化學(xué)染色提示破骨吸收較為活躍;③脛骨松質(zhì)骨區(qū)域內(nèi)MMP-2,MMP-9,MMP-13表達明顯增多。
  2.皮質(zhì)骨:相

7、比對照組,實驗組小鼠①脛骨皮質(zhì)骨中骨細(xì)胞數(shù)量明顯減少;②脛骨皮質(zhì)骨中骨陷窩不同程度的擴大,并且空陷窩的數(shù)量增加;③脛骨皮質(zhì)骨中出現(xiàn)大小不一的裂隙,在HE染色中呈現(xiàn)與周圍正常骨皮質(zhì)不均一的染色狀態(tài);④脛骨皮質(zhì)骨中DMP-1表達有所減少,SOST表達增多;MMP-2表達明顯增加,且主要集中在骨細(xì)胞及骨陷窩內(nèi)表達;MMP-13表達有所增加,并且主要在裂隙中表達;MMP-9表達無明顯差異。
  第二階段:
  1.MTT法顯示,加入

8、Dex后,MLO-Y4細(xì)胞增殖受到抑制,并與給藥濃度和時間相關(guān)。
  2.qRT-PCR結(jié)果表明,Dex增加了MLO-Y4骨樣細(xì)胞中MMP-2、-13mRNA的表達水平,并呈劑量、時間依賴效應(yīng)。
  結(jié)論:
  應(yīng)用糖皮質(zhì)激素后,小鼠脛骨骨小梁中MMP-2、9、13的表達明顯增多提示松質(zhì)骨骨量減少與MMP-2、9、13增多相關(guān)。皮質(zhì)骨中骨細(xì)胞發(fā)生骨細(xì)胞性骨溶解,MMP-2、13表達增多并且多集中在骨細(xì)胞及皮質(zhì)骨裂隙中,

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