基于問號鉤端螺旋體rLipL32-1-LipL21-OmpL1-2融合抗原ELISAs的建立及應用.pdf

1、背景和目的:鉤端螺旋體(簡稱鉤體)病是問號鉤體(Leptospira interrogans)感染引起的全球性流行人獸共患傳染病。目前鉤體病血清學診斷方法主要是顯微鏡凝集試驗(microscope agglutination test，MAT)，該方法雖有較高特異性，但存在操作繁復、敏感性低、不能早期診斷及高通量檢測等缺點。此外，MAT需采用問號鉤體新鮮培養(yǎng)物作為凝集原，也存在安全性問題。有文獻報道，問號鉤體穿膜蛋白OmpL1、外膜脂蛋

2、白LipL21和LipL32均是問號屬特異性表面蛋白抗原，均能誘導機體產生特異性抗體，故有可能作為通用型鉤體病血清學診斷方法的抗原。最近，本實驗室成功地構建了lipL32/1-lipL21-ompL1/2人工融合基因并表達了其產物rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2。實驗表明rLipL32/1- LipL21-OmpL1/2具有良好的抗原性和交叉免疫反應性，可作為研制通用型問號鉤體基因工程疫苗及通用型鉤體病血清學檢測的抗原。

3、為了建立敏感、特異和通用的鉤體病血清學診斷方法，本研究建立以rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2為包被抗原、用于檢測特異性血清IgG和IgM的ELISAs，并對其檢測鉤體病人血清標本的效果進行了考核。 實驗方法:采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝膠圖象分析系統(tǒng)檢測目的重組蛋白rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2表達量。采用免疫雙擴散試驗及Western Blot鑒定rLipL32/1- LipL21-

4、OmpL1/2的免疫原性。采用顯微鏡凝集試驗(MAT)檢測鉤體病人血清及rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2兔抗血清對我國問號鉤體參考標準株的效價。分別以rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2、rLipL32/1、rLipL21和rOmpL1/2為包被抗原，建立檢測血清特異性IgM和IgG的ELISAs并用于檢測107份MAT陽性鉤體病人血清標本。 結果:rLipL32/1-LipL21- OmpL1/2兔

5、抗血清免疫雙擴效價為1∶4。rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2抗血清能識別rLipL32/1- LipL21-OmpL1/2以及rLipL32/1、rLipL21、rOmpL1/2。rLipL32/1- LipL21-OmpL1/2能與問號鉤體56601株全菌兔抗血清以及黃疸出血群、流感傷寒群、波摩那群、秋季群問號鉤體感染病人血清出現陽性雜交信號。MAT結果證實，66％(71/107)病人感染黃疸出血群問號鉤體，rLipL

6、32/1-LipL21-OmpL1/2兔抗血清對我國15株問號鉤體參考標準株的凝集效價為1∶20～1∶160。rLipL32/1- LipL21-OmpL1/2、rLipL32/1、rLipL21、rOmpL1/2抗原用于檢測107例鉤體病人血清特異性IgM的ELISA陽性率分別為89.7％、75.7％、85.1％和79.4％，用于檢測特異性IgG的ELISA陽性率分別為99.1％、99.1％、94.4％和86.0％。rLipL32/1

7、-LipL21-OmpL1/2-IgM-ELISA檢測陽性率高于其它三種檢測IgM的ELISAs(P＜0.05)，rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2-lgG-ELISA檢測陽性率高于rOmpL1/2- IgG-ELISA(P＜0.05)，但與rLipL21-IgG-ELISA及rLipL32/1-IgG-ELISA接近(P＞0.05)。 結論:rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2具有良好的抗原性和交叉免