不同頻次針刺預(yù)處理對(duì)OVA致敏氣道高反應(yīng)性小鼠的炎癥調(diào)節(jié)作用.pdf

1、背景:
　　氣道高反應(yīng)性與氣道炎癥是支氣管哮喘的特征性表現(xiàn)。在對(duì)炎癥反應(yīng)及氣道高反應(yīng)性的病理生理學(xué)研究過(guò)程中，出于倫理與研究可行性出發(fā)，研究者常需用到氣道高反應(yīng)性動(dòng)物模型，復(fù)制出可靠穩(wěn)定的氣道高反應(yīng)性模型是必不可少的。建立大部分氣道高反應(yīng)性模型，動(dòng)物多接受抗原致敏與激發(fā)兩個(gè)過(guò)程。激發(fā)方式有兩種:滴鼻激發(fā)與霧化激發(fā)，哪種激發(fā)方式建立的氣道高反應(yīng)性模型更好甚少文獻(xiàn)做相關(guān)報(bào)道。因哮喘是無(wú)法根治的疾病，大部分患者需長(zhǎng)期服用擴(kuò)支氣管藥及糖皮

2、質(zhì)激素，而近年來(lái)對(duì)這些藥物的副作用及不良反應(yīng)報(bào)道使得越來(lái)越多的醫(yī)生與患者重視并接受副作用小且廉價(jià)的針刺治療。而大量臨床與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明針刺可調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，緩解氣道炎癥反應(yīng)，但目前鮮少文獻(xiàn)對(duì)不同頻次針刺治療是否對(duì)針刺療效產(chǎn)生影響方面做研究探討。
　　實(shí)驗(yàn)一、不同激發(fā)方法對(duì)OVA致敏氣道高反應(yīng)小鼠模型的影響
　　目的:
　　通過(guò)兩種不同激發(fā)方法建立小鼠氣道高反應(yīng)模型，比較激發(fā)后小鼠的癥狀表現(xiàn)，Penh，肺泡灌洗液白細(xì)胞總

3、數(shù)，選擇較優(yōu)氣道高反應(yīng)模型。
　　方法:
　　以6-8周balb/c雌性小鼠作為觀察對(duì)象，隨機(jī)分為空白組、滴鼻激發(fā)模型組和霧化激發(fā)模型組，每組8-10只?？瞻捉M只生理鹽水致敏，不激發(fā);滴鼻組與霧化組均在第4、11、18天腹腔注射50ug卵清蛋白(ovalbumin，OVA)+2mg氫氧化鋁佐劑，滴鼻組在第25天麻醉后滴鼻1％OVA50ul激發(fā)，連續(xù)3天;霧化組則在同一天1％霧化OVA30min，觀察OVA激發(fā)后小鼠的表現(xiàn)。末

4、次激發(fā)后24h霧化乙酰甲膽堿(methach-oline，Mch)檢測(cè)增強(qiáng)呼吸間歇(enhanced pause，Penh)。Penh檢測(cè)后24h麻醉后行肺泡灌洗術(shù)(bronchoavleolar lavage，BAL)收集肺泡灌洗液，檢測(cè)白細(xì)胞總數(shù)，做肺組織切片HE染色，三組間兩兩比較以上指標(biāo)評(píng)價(jià)不同激發(fā)方式的氣道高反應(yīng)模型。
　　結(jié)果:
　　(1) OVA激發(fā)后表現(xiàn):霧化組小鼠霧化過(guò)程中出現(xiàn)撓鼻、腹式呼吸;滴鼻組小鼠滴鼻

5、后出現(xiàn)腹式呼吸，尾部、嘴唇紫紺，甚至2只小鼠出現(xiàn)死亡。
　　(2) Penh檢測(cè):與空白組對(duì)比，滴鼻組在低濃度6.25mg/ml開(kāi)始存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;而霧化組則在吸入12.5mg/ml時(shí)與空白組、滴鼻組產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　(3)白細(xì)胞總數(shù):滴鼻組、霧化組肺泡灌洗液白細(xì)胞總數(shù)顯著高于對(duì)照組且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;滴鼻組肺泡灌洗液白細(xì)胞總數(shù)顯著高于霧化組，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　滴鼻激發(fā)建立的OVA致敏氣道高反應(yīng)

6、性模型比霧化激發(fā)組相關(guān)指標(biāo)更明顯，但是滴鼻激發(fā)時(shí)容易導(dǎo)致小鼠死亡，實(shí)驗(yàn)初期應(yīng)考慮到這一弊端，適當(dāng)增加樣本量。
　　實(shí)驗(yàn)二、不同頻次針刺預(yù)處理對(duì)OVA致敏氣道高反應(yīng)小鼠的炎癥調(diào)節(jié)作用
　　目的:
　　通過(guò)比較不同頻次針刺預(yù)處理對(duì)OVA致敏氣道高反應(yīng)小鼠的Penh，肺泡灌洗液白細(xì)胞總數(shù)，肺組織病理形態(tài)，肺泡灌洗液IL-4、TNF-γ、IgE水平，評(píng)價(jià)3天針刺與7天針刺預(yù)處理對(duì)OVA致敏氣道高反應(yīng)小鼠的炎癥調(diào)節(jié)作用，并初步探

7、討針刺對(duì)氣道高反應(yīng)的調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　方法:
　　以6-8周balb/c雌性小鼠為觀察對(duì)象，隨機(jī)分為空白組（A組）、模型組（B組）、3天針刺組（C組）和7天針刺組（D組），按照實(shí)驗(yàn)一滴鼻組方法建立氣道高反應(yīng)性模型。第13天開(kāi)始用裝訂線捆綁四肢固定各組小鼠，每次20分鐘，隔天1次，共7次。針刺7天組捆綁同時(shí)開(kāi)始針刺足三里(3mm)、大椎(3mm)（參照針刺治療哮喘臨床選穴規(guī)律），平補(bǔ)平泄，每次20min，隔天一次，共7次。C組從

8、第21天捆綁時(shí)開(kāi)始針刺足三里(3mm)、大椎(3mm)，平補(bǔ)平泄，每次20min，隔天一次，共3次。以penh，白細(xì)胞總數(shù)、血清IgE、肺泡冠洗液中IL-4、TNF-γ指標(biāo)評(píng)價(jià)針刺效果。
　　結(jié)果:
　　(1) Penh水平:模型組與對(duì)照組、針刺A組、針刺B組霧化吸入Mch各個(gè)濃度級(jí)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;針刺A組與針刺B組比較，低濃度Mch（6.25與12.5mg/ml）不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，在高濃度級(jí)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;
　　(2

9、)肺組織病理切片:HE染色可見(jiàn)模型組支氣管與血管周圍可見(jiàn)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，針刺兩組比模型組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況稍緩解，而針刺B組嗜酸性粒子細(xì)胞浸潤(rùn)情況比針刺A組稍輕。
　　(3)白細(xì)胞總數(shù):模型組白細(xì)胞總數(shù)最高，針刺A組次之，針刺B組又次之，空白組最少;針刺兩組與模型組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但針刺A組與B組不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　(4)與空白組比較，其余三組IL-4、IgE水平增加，IFN-γ水平下降，且均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05