糖尿病結(jié)腸動力障礙平滑肌細胞凋亡機制及胰島素對其干預的研究.pdf

1、目的：
　　 糖尿病結(jié)腸動力障礙是糖尿病(diabetes mellitus，DM)常見的并發(fā)癥，嚴重影響著患者的生活質(zhì)量，其發(fā)病機制尚不完全清楚，可能與自主神經(jīng)、Cajal間質(zhì)細胞(interstitial cells of Cajal，ICC)及平滑肌病變、高血糖等多種因素異常有關(guān)。近來研究發(fā)現(xiàn)細胞凋亡在DM及其部分并發(fā)癥的發(fā)生中起重要作用。本研究對DM大鼠進行胰島素干預，采用實時熒光定量PCR法，檢測各組平滑肌細胞中Bax

2、、Bcl-2、Caspase-3的表達，從mRNA水平研究平滑肌凋亡在糖尿病結(jié)腸動力障礙發(fā)病機制中的作用，及胰島素、血糖對DM結(jié)腸平滑肌凋亡的影響機制。內(nèi)容
　　 健康雄性SD大鼠隨機分為正常組和造模組。造模組大鼠尾靜脈一次性注射鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)40mg/kg，72h后尾靜脈采血，測得血糖≥16.7mmol/L且能維持1周以上者為造模成功。造模成功的大鼠隨機分為DM6周組(C組)、DM10周組(

3、D組)、胰島素第0周干預6周殺組(E組)、胰島素第0周干預10周殺組(F組)、胰島素第6周干預10周殺(G組)，正常組分為正常6周組(A組)、正常10周組(B組)。E、F組大鼠自造模成功后每天皮下注射魚精蛋白鋅胰島素16U/kg，G組大鼠造模成功后飼養(yǎng)6周后注射，A組、C組、E組于成模第6周處死，其余組于第10周處死。以HE染色法觀察結(jié)腸組織平滑肌的變化，采用實時熒光定量PCR法對各組大鼠結(jié)腸平滑肌細胞中Bax、Bcl-2、Caspas

4、e-3基因的轉(zhuǎn)錄水平進行檢測。
　　 方法：
　　 1.實驗方法：糖尿病模型的建立；石蠟包埋技術(shù)；HE染色；細胞總RNA提??；實時熒光定量PCR技術(shù)。
　　 2.統(tǒng)計方法：所有數(shù)據(jù)通過SPSS16.0軟件進行處理，經(jīng)Levene檢驗驗證方差齊性。多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，多組問均數(shù)兩兩比較采用SNK-q檢驗。P<0.05被認為有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.用STZ復制糖尿病模型成

5、功，造模后監(jiān)測血糖均≥16.7mmol/1、血清胰島素水平下降、胃腸推進率減慢，糖尿病結(jié)腸動力障礙模型復制成功。
　　 2.DM組與正常對照組比較：大鼠結(jié)腸平滑肌變薄，細胞數(shù)目減少，Bcl-2的表達減少，Bax、Caspase-3的表達增加，有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，并且隨著DM病程的進展，改變越明顯。
　　 3.胰島素干預組較DM組大鼠結(jié)腸平滑肌增厚，細胞數(shù)目增多，Bcl-2的表達增加，Bax、Caspase-3的

6、表達減少，有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，并且對DM大鼠早期進行胰島素干預，大鼠結(jié)腸平滑肌、Bcl-2、Bax、Caspase-3的變化更明顯，具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.DM組大鼠血糖升高，胰島素水平下降，平滑肌變薄，細胞數(shù)目減少，Bcl-2表達減少，Bax、Caspase-3表達增多，且隨著DM進程變化明顯。
　　 2.胰島素干預組較DM組大鼠結(jié)腸平滑肌增厚，細胞數(shù)目多，Bcl-2

7、的表達增加，Bax、Caspase-3的表達減少，并且對DM大鼠早期進行胰島素干預，大鼠結(jié)腸平滑肌、Bcl-2、Bax、Caspase-3的變化更明顯
　　 以上結(jié)果表明Bcl-2在DM組表達減少，胰島素干預組表達增加，Bax、Caspase-3在DM組表達增加，胰島素干預組表達減少。由于Bcl-2、Bax、Caspase-3是細胞凋亡中的關(guān)鍵基因，因此本實驗結(jié)果說明平滑肌細胞凋亡是糖尿病結(jié)腸動力障礙發(fā)病機制之一，胰島素具有抗凋