全反式維甲酸誘導(dǎo)人卵巢癌細(xì)胞凋亡過程中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)及其合成的IV型膠原酶的變化.pdf

1、目前,國(guó)外關(guān)于維甲酸誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡以及維甲酸作用后IV型膠原酶的變化已有報(bào)道,但國(guó)內(nèi)卻未見報(bào)道.本系列實(shí)驗(yàn)應(yīng)用掃描電鏡、透射電鏡、DNA斷裂分析及流式細(xì)胞術(shù)觀察ATRA誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞CAOV3凋亡;應(yīng)用明膠酶譜法、RT-PCR及Western Blot技術(shù)分析ATRA作用卵巢癌細(xì)胞凋亡后IV型膠原酶的變化;應(yīng)用免疫組化方法、Western Blot技術(shù)觀察IV型膠原酶及其組織抑制物在卵巢腫瘤中的表達(dá)及意義.旨在研究IV型膠原酶及其組織

2、抑制物在卵巢腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲和轉(zhuǎn)移過程中的意義,觀察全反式維甲酸能否抑制腫瘤細(xì)胞分泌IV膠原酶,最終降低腫瘤細(xì)胞的侵襲能力.1.應(yīng)用透射電鏡技術(shù)觀察ATRA作用人卵巢癌細(xì)胞CAOV3后,細(xì)胞變圓,表面微絨毛明顯減少.RA作用24核內(nèi)染色質(zhì)邊集,沒核膜內(nèi)側(cè)分布,核膜皺褶內(nèi)陷.核周片層狀內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較多,可見輕微擴(kuò)張.RA誘導(dǎo)48h,核染色質(zhì)更加致密,濃縮分塊,胞質(zhì)中有空泡形成,細(xì)胞表面微絨毛消失.RA誘導(dǎo)72h,細(xì)胞表面出泡,脫落形成膜包

3、裹的凋亡小體,有些含有固縮的核碎片.結(jié)果表明ATRA可以誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞凋亡,呈時(shí)間和濃度依賴性.2.在觀察ATRA誘導(dǎo)人卵巢癌細(xì)胞CAOV3細(xì)胞凋亡的同時(shí)又觀察了凋亡過程中IV型膠原酶(MMP-2、MMP-9)的變化.應(yīng)用明膠酶譜法、RT-PCR技術(shù)及Western blot分析ATRA作用卵巢癌細(xì)胞72小時(shí)后IV型膠原酶的活性變化、MMP-2蛋白及mRNA水平表達(dá).結(jié)果表明ATRA誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡的同時(shí)可抑制腫瘤細(xì)胞分泌IV

4、型膠原酶,其抑制作用很可能發(fā)生于轉(zhuǎn)錄水平,支持RA可能通過抑制基質(zhì)降解來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的能力的推論,為進(jìn)一步研究有效的抑癌藥物提供方向.3.金屬蛋白酶抑制因子(TIMP)是IV型膠原酶的天然抑制劑并與體內(nèi)的MMP平衡,為探討基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2、MMP-9)及其組織抑制物(TIMP-2)在不同卵巢腫瘤組織中的表達(dá),我們采用免疫組化S-P法及Western blot分別對(duì)128例和20例卵巢腫瘤組織的MMP-2、MMP-9及