利用改良胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)測(cè)定雙酚A和金屬鎘的胚胎發(fā)育毒性.pdf

1、目的:建立以神經(jīng)分化為觀察終點(diǎn)的改良胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)體系，并利用該體系判定雙酚A和氯化鎘的胚胎發(fā)育毒性。
　　方法:①神經(jīng)分化方法的建立與驗(yàn)證:應(yīng)用熒光定量PCR檢測(cè)神經(jīng)分化過(guò)程中神經(jīng)細(xì)胞特異性標(biāo)志物MAP2、Nestin、KCC2的mRNA表達(dá)情況，以探討最佳胚胎干細(xì)胞首次接種密度以及神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)時(shí)間;應(yīng)用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)神經(jīng)分化過(guò)程中神經(jīng)細(xì)胞特異性標(biāo)志物MAP2、Nestin、KCC2、β-TubullinⅢ的蛋白表達(dá)情況

2、，以驗(yàn)證神經(jīng)分化方法的可行性。②改良EST試驗(yàn)的建立:將建立的神經(jīng)分化方法與經(jīng)典EST結(jié)合，判定雙酚A和氯化鎘的胚胎發(fā)育毒性。設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照5-Fu和陰性對(duì)照Penicillin-G，以檢測(cè)該判定體系的可信性。
　　結(jié)果:①胚胎干細(xì)胞首次接種密度為15×104/孔，神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)時(shí)間為12天，相比于MAP2和KCC2，Nestin更適合作為神經(jīng)分化抑制試驗(yàn)的檢測(cè)指標(biāo)。免疫熒光技術(shù)結(jié)果表明，神經(jīng)細(xì)胞特異性標(biāo)志物幾乎表達(dá)于所有細(xì)胞中

3、，表明該神經(jīng)分化方法可行。②以神經(jīng)分化為觀察終點(diǎn)的EST判定BPA具有弱胚胎發(fā)育毒性，而CdCl2具有強(qiáng)胚胎發(fā)育毒性。陽(yáng)性對(duì)照5-Fu被判定為具有強(qiáng)胚胎發(fā)育毒性，而陰性對(duì)照Penicillin-G被判定為無(wú)胚胎發(fā)育毒性，表明該檢測(cè)體系具有可信性。
　　結(jié)論:本研究初步探討了胚胎干細(xì)胞神經(jīng)分化方法，在此基礎(chǔ)上建立了以神經(jīng)分化為觀察終點(diǎn)的胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)，并成功檢測(cè)了BPA和CdCl2的胚胎發(fā)育毒性。對(duì)該實(shí)驗(yàn)體系的進(jìn)一步完善，將有利于提