錦帶花表型、花粉形態(tài)及ISSR分子標(biāo)記比較研究.pdf

1、錦帶花(Welgela florida(Bunge)A.DC)是珍貴的觀賞植物種質(zhì)資源,在河北省主要集中分布在承德霧靈山地區(qū),有粉色和白色兩種花色。本研究以承德霧靈山區(qū)野生錦帶花為材料,從枝、葉、花等器官的表型形態(tài),孢粉形態(tài)和DNA分子標(biāo)記3個方面分別對白色和粉色錦帶花兩個群體進(jìn)行了分析研究。研究結(jié)果如下:
　　 1.不同花色錦帶花葉1/4寬、葉3/4寬、葉寬距葉基處的距離、葉尖角、葉基角以及花冠長等形態(tài)因子均有極其顯著差異。<

2、br>　　 2.錦帶花白花花粉粒為三突起不規(guī)則圓形,三個形狀較規(guī)則萌發(fā)孔蓋分布在對稱的三個部位;粉花花粉粒為較規(guī)則圓形,有一個花粉萌發(fā)孔蓋,形狀不規(guī)則。兩花色花粉粒大小差異明顯,白花的花粉粒直徑為80.9±2.9μm,粉花的花粉粒直徑為77.7±1.2μm;花粉粒表面有錐狀突出物,錐狀突出物分布較白花分布密集。
　　 3.建立了錦帶花ISSR.PCR反應(yīng)體系,并對體系中各個影響因素進(jìn)行了優(yōu)化,即在20μL的反應(yīng)體系中,DNA模

3、板20.00 ng/μL,0.20mmol/L dNTP,稀釋10倍體積高保真PCR緩沖液含(Mg2+)3.00μL;1.00μmol/L引物,1.25UTaq酶。擴(kuò)增程序為:94℃預(yù)變性5min;94℃變性30s,52℃退火45s,72℃延伸90s,45個循環(huán);最后72℃延伸5min,4℃保溫。用此反應(yīng)體系擴(kuò)增得到了錦帶花的ISSR圖譜。
　　 4.采用ISSR技術(shù),對2個花色錦帶花群體的DNA進(jìn)行擴(kuò)增,每個引物擴(kuò)增出譜帶2-

4、7條,平均擴(kuò)增出4.5條譜帶,產(chǎn)物大小均在200bp-2000bp之間,多態(tài)位點的數(shù)量為12,多態(tài)位點的百分比為100.00％。利用POPGENE32軟件分析得到,片段H上的等位基因頻率在白色和粉色群體間有較大差異,白色群體出現(xiàn)的少,粉色群體出現(xiàn)的多;白色群體在不同的基因位點上A值變異大,粉色群體的Shannon’s信息指數(shù)高于白色群體,粉色群體的基因多樣性較高;兩個花色群體的無偏差遺傳相似度(I)為0.6709,說明群體間的遺傳變異較