灰色鏈霉菌RX-17溶菌酶基因文庫的構(gòu)建及篩選.pdf

1、分類號密級≥▲，^單位代碼：學號：紊鼻孥碩士學位論文ShandongUniversityMaster’SThesis10422200210884灰色鏈霉菌RX17溶菌酶基因文庫的構(gòu)建及篩選作者姓名藍瞳丕專業(yè)堂生物堂指導教師姓名強垂壁專業(yè)技術(shù)職務熬援2Q逝年上月j亙_日山東大學碩士學位論文灰色鏈霉菌RX17溶菌酶基因文庫的構(gòu)建及篩選摘要：灰色鏈霉菌(Streptomycesgriseus)Rx17所產(chǎn)的溶菌酶系，不僅具有B一1，4一^L乙

2、酰胞壁質(zhì)酶活力，還具有pl，4一心6一伊二乙酰胞壁質(zhì)酶活力。前期研究發(fā)現(xiàn)本菌株產(chǎn)生溶菌酶含有多個組分。Rl、R2和R3，對金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)及變形鏈球菌(StreptococcusmumnsIn【曲ritt)有溶解作用。本文采用隨機鳥槍法構(gòu)建基因文庫，篩選溶菌酶基因，為今后溶菌酶基因組的研究奠定基礎。限制性內(nèi)切酶Sad3AI對灰色鏈霉菌(Sgriseus)RX一17基因組DNA進行不完全酶切，回收

3、210kb的DNA片段；回收片段與經(jīng)毖蒯I酶切、CIAP去磷酸化處理后的pUCl9連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化昱coliDH5a感受態(tài)細胞；通過Amp抗性及a互補原理進行初篩，構(gòu)建基因文庫?；疑溍咕?Sgriseus)溶菌酶對變形鏈球菌(&m“細堪Ingbrift)有著顯著的溶解作用，因此我們用變形鏈球菌(Smumn$hlgbdu)作底物用酶活測定的方法對文庫進行篩選。25℃低溫誘導對文庫進行篩選，得到兩株具有酶活的重組子。破碎細胞，20