普通變形桿菌TWN-3株基因文庫構(gòu)建及免疫印跡篩選.pdf

1、長(zhǎng)期以來，對(duì)水產(chǎn)疫病的控制主要依靠使用各種抗生素和化學(xué)藥物，但大量使用藥物產(chǎn)生的藥物殘留問題與對(duì)食品品質(zhì)與安全日益嚴(yán)格的要求這對(duì)矛盾越發(fā)突出。近年來，我國(guó)水產(chǎn)品因?yàn)樗幬餁埩舫瑯?biāo)而多次出口受阻就是慘痛的教訓(xùn)。不僅造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，而且嚴(yán)重打擊了養(yǎng)殖戶的生產(chǎn)積極性，影響水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)進(jìn)一步發(fā)展。1991年，Hansen等首先報(bào)道了外源基因能夠在鯉魚肌肉組織中表達(dá)。1996年，Anderson等第一次報(bào)告了帶有傳染性造血組織壞死癥病毒(Inf

2、ectious haematopoietic necrosis virus，IHNV)糖蛋白基因的質(zhì)粒能夠在虹鱒中表達(dá)，并且能夠保護(hù)IHNV病毒對(duì)受免疫魚的感染。隨后的一些實(shí)驗(yàn)也證明，在多種魚體內(nèi)，外源基因不僅能夠高效，持久地表達(dá)，而且能夠引起宿主魚類對(duì)外源蛋白的免疫應(yīng)答。這些為構(gòu)建魚類DNA疫苗提供了理論基礎(chǔ)。同時(shí)對(duì)魚病防治指出了一個(gè)新的途徑。通過有計(jì)劃的對(duì)養(yǎng)殖魚類的主要疾病進(jìn)行疫苗接種可以大大減少抗生素等化學(xué)藥物在養(yǎng)殖魚類上的使用量

3、。提高水產(chǎn)品品質(zhì)和食用安全性，促進(jìn)我國(guó)水產(chǎn)品出口創(chuàng)匯。 普通變形桿菌(Proteus．vulgaris)廣泛存在于自然界，是一種條件致病菌。由該菌引發(fā)的人類疾病國(guó)內(nèi)有較多報(bào)道，此類菌對(duì)蝦、蟹、赤點(diǎn)石斑魚、鱷魚等水生生物均具有感染性甚至致死，其中不少品種是水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物。本實(shí)驗(yàn)室成功從大口鲇病魚體內(nèi)分離出普通變形桿菌TWN-3株，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)其pH和鹽的耐受度強(qiáng)，在適宜生長(zhǎng)溫度范圍內(nèi)生長(zhǎng)十分迅速，因此十分容易造成爆發(fā)性疾病，對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖

4、生產(chǎn)是一種潛在的威脅。同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)，該菌株對(duì)許多抗生素都不敏感，因此一旦發(fā)病，目前的常規(guī)魚病防治手段難以取得明顯的效果。嘗試用DNA疫苗的方法對(duì)其進(jìn)行預(yù)防不失為一個(gè)有益的嘗試。成功構(gòu)建DNA疫苗的必須獲得相應(yīng)抗原的主要保護(hù)性抗原基因。本研究用帶有普通變形桿菌TWN-3株總DNA片段的重組pUC18質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞，構(gòu)建普通變形桿菌TWN-3株DNA文庫，獲得了3.6×10<'3>個(gè)帶有插入片段的重組子。根據(jù)Clark