阿維菌素對(duì)日本沼蝦的毒性作用及其藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、長(zhǎng)三角地區(qū)是我國(guó)日本沼蝦(Macrobrachiumnipponense)的主要養(yǎng)殖區(qū)，但近年來(lái)由于養(yǎng)殖污染、養(yǎng)殖技術(shù)等原因?qū)е氯毡菊游r的產(chǎn)量急劇下降，市場(chǎng)供不應(yīng)求。而魚(yú)蝦混養(yǎng)模式中日本沼蝦畝增產(chǎn)效益高達(dá)1倍-2倍，可謂開(kāi)辟了一條新路。阿維菌素類(lèi)藥物(Avermectins，AVMs)是由阿維鏈霉菌素通過(guò)自然發(fā)酵產(chǎn)生的一類(lèi)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素，阿維菌素類(lèi)藥物作為一類(lèi)生物農(nóng)藥，并具有化學(xué)結(jié)構(gòu)新穎，作用機(jī)制獨(dú)特，殺蟲(chóng)活性強(qiáng)，殺蟲(chóng)譜廣等特點(diǎn)，已被

2、廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中，在用于魚(yú)蝦蟹混養(yǎng)塘中治療三代蟲(chóng)、指環(huán)蟲(chóng)、魚(yú)虱等寄生蟲(chóng)防治時(shí)，阿維菌素的毒性作用常引起同池養(yǎng)殖的日本沼蝦中毒死亡事件。本文結(jié)合當(dāng)前的養(yǎng)殖狀況初步研究了阿維菌素對(duì)日本沼蝦的毒性作用及在其體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)。以期為阿維菌素在水產(chǎn)養(yǎng)殖中提供更加科學(xué)的用藥依據(jù)。
　　 以24h換液藥浴法進(jìn)行測(cè)定AVM對(duì)日本沼蝦的急性毒性試驗(yàn)，阿維菌素對(duì)日本沼蝦96h半致死濃度為0.0533ug/ml，95％的置信區(qū)間為0.0495

3、～0.0573ug/ml，SC為0.0053ug/ml。
　　 建立了阿維菌素在日本沼蝦體各組織(肌肉、肝胰腺、血淋巴)和水體中的反相高效液相色譜紫外檢測(cè)法。各組織試樣和水樣經(jīng)乙酸乙酯提取，45℃下氮?dú)獯蹈?，正己烷去脂凈化，色譜柱采用HypersilC18反相色譜柱，流動(dòng)相：甲醇-水(86+14)，流速1.0mL/min，紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)245nm，進(jìn)樣量10uL的色譜條件下進(jìn)行反相高效液相色譜一紫外檢測(cè)。結(jié)果顯示阿維菌素質(zhì)量濃度

4、在0.005～2mg/l范圍內(nèi)與峰面積呈線性關(guān)系，日本沼蝦肌肉、肝胰腺、血淋巴平均添加回收率分別為89.4％～102.4％、95.3％～98.9％、86.7～100.6％，日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)分別為2.1％～7.2％、2.0～4.3％、3.9～7.9％，日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)分別為5.5％～8.4％、6.4～8.0％、5.3～8.9％，方法的檢出限(3S/N)分別為0.002ug/ml、0.004ug/ml、0.004ug/m

5、l。水樣中的平均添加回收率為88.8％～95.7％，日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)為3.3％～5.4％，日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)為4.3％～6.0％，方法的檢出限(3S/N)為0.002ug/ml。
　　 根據(jù)AVM在日本沼蝦體內(nèi)的毒性試驗(yàn)，確定了阿維菌素在日本沼蝦體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)給藥劑量，即以0.005ug/ml濃度，以此為基礎(chǔ)展開(kāi)AVM在日本沼蝦體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)的研究。在22～25℃實(shí)驗(yàn)水溫的條件下采用藥浴的方法，每2

6、4h換藥水一次，換液一半，維持藥物濃度恒定，共持續(xù)21d；21d之后每24h改換未添加阿維菌素的實(shí)驗(yàn)用水，直到40d。結(jié)果表明：AVM在日本沼蝦組織中最高濃度由大到小依次為肝胰腺、血淋巴、肌肉。到20d時(shí)日本沼蝦肌肉、肝胰腺、血淋巴中的AVM濃度均達(dá)到最高值且維持穩(wěn)定狀態(tài)，其中以肝胰腺中的濃度最高達(dá)到98.60ug/l，其次是血淋巴和肌肉組織分別是28.68ug/l和15.44ug/l。21d停止給藥后，各組織中的藥物濃度逐漸下降，藥后

7、40d日本沼蝦各組織中阿維菌素已基本檢測(cè)不到。由于種屬差異、生理差異、給藥劑量、給藥途徑、溫度、鹽度、pH值等因素的均能影響影響水生生物藥代動(dòng)力學(xué)殘留，同種藥物在不同水生生物體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)有很大差異。因此應(yīng)慎重將一種水生生物的臨床給藥劑量和休藥期應(yīng)用到另一水生生物。本實(shí)驗(yàn)條件下，AVM以0.005ug/ml濃度連續(xù)給藥20天，建議其休藥期最短為20天。
　　 研究了日本沼蝦暴露在不同濃度的阿維菌素中組織的病理變化，結(jié)果表明

8、AVM濃度0.005mg/1以上持續(xù)藥浴27d日本沼蝦的肝胰腺、觸角腺、鰓等開(kāi)始出現(xiàn)不同程度的組織損傷，其中肝胰腺在0.01mg/l濃度組下觀察到肝胰腺明顯腫大，肝小管間排列緊密，管內(nèi)腔融合，界限模糊，到第27d時(shí)肝胰腺發(fā)生了嚴(yán)重的病理變化，肝細(xì)胞空泡變性，細(xì)胞核腫大、溶解、甚至消失，在蝦體內(nèi)還出現(xiàn)部分細(xì)胞壞死；觸角腺在0.01mg/lAVM濃度組藥浴23d后，端囊、腎管、迷路的許多細(xì)胞的細(xì)胞核濃縮，細(xì)胞腫大，細(xì)胞膜破裂，組織液流出，核

9、仁散落到細(xì)胞質(zhì)間隙中，還發(fā)現(xiàn)部分細(xì)胞死亡，組織出現(xiàn)了大量的空洞；鰓組織在0.01mg/lAVM濃度組藥浴23d鰓絲部分上皮細(xì)胞核腫大，毛細(xì)血管擴(kuò)張，基底膜肥大，鰓絲末端明顯腫脹，鰓絲上皮細(xì)胞增生，細(xì)胞核腫大導(dǎo)致上皮細(xì)胞官腔堵塞，鰓絲由排列有序的的2-3層細(xì)胞變?yōu)闊o(wú)規(guī)則排列的多層細(xì)胞。到第27d時(shí)可觀察到鰓上皮細(xì)胞空泡變性，部分上皮細(xì)胞核呈梭形，部分細(xì)胞脫落到細(xì)胞質(zhì)中；腸在0.01mg/l濃度組藥浴23d可觀察到腸上皮細(xì)胞核腫大，細(xì)胞空泡