慢性咽炎的咽部菌群多樣性特征分析.pdf

1、背景:
　　慢性咽炎（chronic pharyngitis）為咽部粘膜、粘膜下及淋巴組織的慢性炎癥，其病程長(zhǎng)，癥狀頑固，較難治愈。近些年來(lái)，空氣污染的加重使慢性咽炎的發(fā)病逐年增多，同時(shí)感染后亂用抗生素又使慢性咽炎的癥狀加重，遷延不愈。一般認(rèn)為慢性咽炎的發(fā)生多與致病菌感染相關(guān)，近來(lái)研究表明咽部菌群失調(diào)與慢性咽炎的關(guān)系更為密切。所以，合理使用抗生素及微生態(tài)調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)咽部菌群平衡，對(duì)于慢性咽炎的預(yù)防和治療具有重要的意義。進(jìn)行咽部菌群

2、的調(diào)節(jié)，首先要解析慢性咽炎咽部菌群的變化特征。DGGE和二代測(cè)序等新的技術(shù)和方法對(duì)咽部菌群特征的系統(tǒng)分析奠定了基礎(chǔ)。解析慢性咽炎患者咽部菌群特征為慢性咽炎的有效防治打開了新思路。
　　目的:
　　分析患者和正常人的咽部菌群結(jié)構(gòu)，探索慢性咽炎患者咽部菌群分布的多樣性變化，找出慢性咽炎患者與正常人咽部差異菌群，為指導(dǎo)臨床對(duì)該病進(jìn)行菌群調(diào)節(jié)及針對(duì)性的治療奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.選取15例臨床診斷為單純慢性咽炎患

3、者為研究組，并選取15例正常健康人（非慢性咽炎）作為對(duì)照組。
　　2.取兩組患者的外周靜脈血，測(cè)其白細(xì)胞總數(shù)及其各項(xiàng)血細(xì)胞的數(shù)量，并比對(duì)兩組人群間各項(xiàng)指標(biāo)的差異。
　　3.分別用無(wú)菌咽拭子取口咽部分泌物，對(duì)取到的咽部分泌物提取DNA并將其進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增后聯(lián)合變性梯度凝膠電泳(PCR-DGGE)的方法進(jìn)行菌群多樣性的分析。對(duì)于DGGE電泳結(jié)果進(jìn)行比對(duì)后，將兩組有差異性的條帶進(jìn)行切膠測(cè)序，測(cè)序結(jié)果在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)

4、行Blast對(duì)比分析，最終可獲得兩組部分差異性的菌群種屬。
　　4.用鏈球菌屬、不動(dòng)桿菌屬、金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌四種菌屬（或菌種）的特定引物做驗(yàn)證性PCR，以鑒定兩組人群咽部中是否含有這四種菌及其含量的差異。
　　結(jié)果:
　　1.與正常人相比，慢性咽炎患者外周血中白細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞數(shù)量顯著增高(p＜0.05)。
　　2.慢性咽炎患者的咽部菌群種數(shù)比正常人顯著增多(p＜0.01)。
　　3.兩組人

5、群具有差異性的菌屬的測(cè)序結(jié)果:慢性咽炎患者咽部明顯差異的菌屬為兼性雙球菌屬(Gemella)、韋榮球菌屬(Veillonella)、普雷沃菌屬(Prevotella);正常人明顯差異性菌屬為奈瑟菌屬(Neisseria);兩種人群均明顯存在的菌屬中，慢性咽炎患者相對(duì)較少的菌屬為假單胞菌屬(Pseudomonas)，而慢性咽炎患者相對(duì)較多的菌屬為鏈球菌屬（Streptococcus）。
　　4.PCR結(jié)果表明，慢性咽炎患者與正常人咽

6、部鏈球菌屬檢出率均為100％，且慢性咽炎患者咽部鏈球菌屬含量高于正常人(p＜0.05);不動(dòng)桿菌、金黃色葡萄球菌在患者咽部的檢出率略高于正常人;表皮葡萄球菌在兩組人群咽部均未檢出。
　　結(jié)論:
　　1.慢性咽炎患者的咽部粘膜環(huán)境存在有炎癥反應(yīng)。
　　2.慢性咽炎患者咽部菌群多樣性比正常人增高，并出現(xiàn)菌群失調(diào)。
　　3.慢性咽炎咽部的菌群失調(diào)主要以兼性雙球菌屬、韋榮球菌屬、普雷沃菌屬、鏈球菌屬、金黃色葡萄球菌、不動(dòng)