海洋白淺灰鏈霉菌Streptomyces albogriseolus A2002抗腫瘤活性成分的研究.pdf

1、中國海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文海洋白淺灰鏈霉菌StreptomycesalbogriseolusA2002抗腫瘤活性成分的研究姓名：古靜燕申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生藥學(xué)指導(dǎo)教師：崔承彬顧謙群20040701海洋白淺灰鏈霉菌StreptomycF5albogriseolusA2002抗腫瘤活性成分的研究海洋白淺灰鏈霉菌StreptomycesalbogriseolusA2002抗腫瘤活性成分的研究摘要本文自采自膠東半島沿海的24個(gè)海泥、海水樣品

2、中共分離、純化出236株海洋放線菌，采用tsFT210小鼠乳腺癌溫度敏感型細(xì)胞對這些菌株進(jìn)行了體外抗腫瘤活性篩選，經(jīng)過反復(fù)篩選共有9株放線菌活性穩(wěn)定，陽性率為38％，其中3株為Go／G，周期抑制活性，5株為G2／M期周期抑制活性，1株為細(xì)胞毒活性。A2002表現(xiàn)為強(qiáng)的細(xì)胞周期抑制活性，通過初發(fā)酵預(yù)實(shí)驗(yàn)，活性穩(wěn)定，被確定為目的菌株，發(fā)酵7天其活性和菌絲體量達(dá)到最高。經(jīng)中科院微生物所鑒定該菌為白淺灰鏈霉菌(Streptomycesalbog

3、riseolus)。以tsFT210細(xì)胞系活性篩選模型為向?qū)?，采用跟蹤活性部位進(jìn)行分離的方式，確定了發(fā)酵物乙酸乙酯提取物的活性部位。利用硅膠柱層析、反相硅膠柱層析、SephadexLH一20、IIPLC等多種分離手段從A2002兩次發(fā)酵產(chǎn)物乙酸乙酯提取物中分離純化到5個(gè)化合物。根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定了它們的結(jié)構(gòu)，分為兩類化合物，一類為三環(huán)縮醛內(nèi)酯素類化合物，命名為5羥基三環(huán)縮醛內(nèi)酯素(1)，三環(huán)縮醛內(nèi)酯素(2)；一類為環(huán)二肽類化合物

4、，命名為丙氨酸脯氨酸環(huán)二肽(3)，丙氨酸一纈氨酸環(huán)二肽(4)，脯氨酸酪氨酸環(huán)二肽(5)。以tsFT210小鼠乳腺癌細(xì)胞采用SRB法測定化合物1和2的細(xì)胞增殖抑制活性，并結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)測定及配以光學(xué)顯微鏡細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，系統(tǒng)地測試了化合物15的細(xì)胞周期抑制活性。結(jié)果表明，化合物l和化合物2具有細(xì)胞周期抑制活性、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性作用，且其活性具有量效依賴關(guān)系。l，2在低濃度時(shí)為GeM期抑制活性，在中濃度為誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡活性，而在高濃度為