銀杏雄株種質(zhì)資源的分類研究.pdf

1、我國(guó)是銀杏的故鄉(xiāng)，銀杏資源十分豐富。銀杏雌雄異株，其雄株在庭園綠化、授粉樹配置、葉用栽培及花粉的開發(fā)利用中具有特殊的重要位置和作用，迫切需要了解銀杏雄株種質(zhì)資源的遺傳結(jié)構(gòu)及其多樣性，并進(jìn)行銀杏雄株種質(zhì)資源的分類研究。本研究連續(xù)兩年分別調(diào)查測(cè)定了分布在江蘇揚(yáng)州、泰興、姜堰等三個(gè)銀杏主產(chǎn)區(qū)的63個(gè)雄株個(gè)體的栽培歷史、生長(zhǎng)發(fā)育狀況、植物學(xué)性狀、經(jīng)濟(jì)學(xué)性狀，并觀察記載了各雄株個(gè)體的物候期，于銀杏雄株萌芽后30d采集其枝梢先端幼嫩葉片分別采用略加

2、改進(jìn)的改良CTAB法提取葉片中基因組DNA、PCR擴(kuò)增、引物篩選，并應(yīng)用MATLAB對(duì)ISSR分子標(biāo)記結(jié)果和各雄株個(gè)體的平均單葉面積、SLFW、SLDW等三項(xiàng)指標(biāo)分別進(jìn)行基于Nei's距離和基于歐氏距離的聚類分析，結(jié)果表明： 1、從100個(gè)ISSR引物中篩選得到17個(gè)多態(tài)性較好的引物，其序列分別為(GA)8C，(GA)8A，(AC)8G，(CT)8GC，(CT)8GG，(CT)8RG，(AC)8SG，(AC)8GA，(AC)8G

3、G，(AC)8YA，(AC)8YG，(AG)8ST,(TC)8RA，(TC)8YT，(TC)8RT，(CA)8GT，(CA)8AG； 2、17個(gè)ISSR引物共擴(kuò)增得到115個(gè)清晰位點(diǎn)，片段大小為100～2400bp，每個(gè)引物擴(kuò)增條帶3～10條，其中總多態(tài)性位點(diǎn)59個(gè)，多態(tài)性位點(diǎn)百分率(PPB)為48.57％，(AC)8G，(AC)8SG，(AC)8GG的多態(tài)性比率則高于75％，雄株個(gè)體的多態(tài)性位點(diǎn)百分率為32.79％～48.10

4、％； 3、供試銀杏雄株總體遺傳多樣性指數(shù)(Hsp％)為18.8461，63個(gè)銀杏雄株個(gè)體間的Nei's距離在0.0520～0.3245之間，個(gè)體間的遺傳相似系數(shù)為0.6755～0.9480。應(yīng)用最長(zhǎng)距離法進(jìn)行系統(tǒng)聚類，取閾值為0.2739時(shí)，63個(gè)雄株個(gè)體可分為2類，個(gè)體數(shù)分別為23和40；取閾值為0.245時(shí)，兩個(gè)大類又可分為五個(gè)亞類，前者又可分別分為包括10個(gè)和13個(gè)雄株個(gè)體的亞類，后者又可分別分為包括8、14和18個(gè)雄株個(gè)

5、體的亞類。說明本試驗(yàn)條件下銀杏雄株具有豐富的遺傳多樣性、復(fù)雜的遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳背景； 4、本試驗(yàn)條件下，不同分布地區(qū)的供試雄株均勻地分布在兩個(gè)大類、五個(gè)亞類中，說明同一類型的雄株盡管異地分布，但仍表現(xiàn)出親緣關(guān)系較近。其中分布在揚(yáng)州和泰興的59棵雄株表現(xiàn)出遺傳距離較小，推測(cè)兩地的供試雄株中有的系采集古銀杏雄株的枝穗嫁接繁殖后長(zhǎng)成。而姜堰的4棵雄株集中分布于第二類中，親緣關(guān)系較近，說明其可能源自具相同遺傳種質(zhì)的雄株。分布在揚(yáng)州市的28

6、棵雄株樹齡為20～700年，表現(xiàn)出相互間遺傳距離差異較大，而200年樹齡以上的銀杏雄株與其著生距離較近的雄株之間的遺傳距離較小，親緣關(guān)系較近，說明揚(yáng)州市古代不同年代配置的銀杏雄株由不同種型的種核繁殖而成，而近代配置的銀杏雄株有可能是就地取材、就地嫁接繁殖而成； 5、經(jīng)對(duì)揚(yáng)州市28個(gè)供試銀杏雄株單獨(dú)進(jìn)行基于Nei's距離的聚類分析，28個(gè)銀杏雄株個(gè)體間的Nei's距離在0.0520～0.275之間，取閾值為0.25時(shí)，28個(gè)雄株個(gè)

7、體可分為2類，個(gè)體數(shù)分別為16和12；取閾值為0.243時(shí)，兩個(gè)類群又可分為五個(gè)亞類，前者又可分別分為包括4、6和6個(gè)雄株個(gè)體的亞類，后者又可分別分為包括6和6個(gè)雄株個(gè)體的亞類； 6、揚(yáng)州市28個(gè)供試銀杏雄株的平均單葉面積、SLFW、SLDW的變異系數(shù)分別為17.71％、15.99％和17.62％，經(jīng)對(duì)其進(jìn)行基于歐氏距離的聚類分析，28個(gè)銀杏雄株個(gè)體間的歐氏距離在0.08～24.5之間，取閾值為24時(shí)，28個(gè)雄株個(gè)體可分為2類，

8、個(gè)體數(shù)分別為15和13；取閾值為16時(shí)，每一類又可分為2個(gè)亞類，共4個(gè)亞類，前者又可分別分為包括2個(gè)和13個(gè)雄株個(gè)體的亞類，后者又可分別分為包括2個(gè)和11個(gè)雄株個(gè)體的亞類； 7、經(jīng)對(duì)ISSR分子標(biāo)記結(jié)果和平均單葉面積、SLFW、SLDW等測(cè)定結(jié)果的聚類分析結(jié)果比較分析，揚(yáng)州市28個(gè)供試銀杏雄株種質(zhì)資源的ISSR標(biāo)記結(jié)果與營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)的相關(guān)指標(biāo)的聚類分析結(jié)果不盡一致，說明銀杏雄株植物學(xué)和經(jīng)濟(jì)學(xué)性狀既是遺傳基因的表達(dá)結(jié)果，也是環(huán)境條件、