覆盆子的抗氧化活性及其與化學(xué)成分和顯微特征常數(shù)的相關(guān)性研究.pdf

1、隨著人口老齡化的不斷加劇，尋找高效的抗衰老藥物已成為當(dāng)前醫(yī)藥學(xué)研究領(lǐng)域中的熱點問題。覆盆子(FPZ)是一種薔薇科懸鉤子屬植物的果實，在我國大量分布卻少為人知，僅將其近成熟干燥果實作為補肝益腎的傳統(tǒng)藥材使用?，F(xiàn)代藥理研究表明覆盆子具有改善記憶、延緩衰老的功能，是極具潛力的抗衰老天然產(chǎn)物;且抗氧化是很多天然產(chǎn)物抗衰老的主要分子途徑。因此探討FPZ的抗氧化性能及其物質(zhì)基礎(chǔ)對于揭示FPZ抗衰老的分子機制及深層次的開發(fā)和利用具有重要意義。然而，目

2、前尚未見相關(guān)系統(tǒng)研究。
　　 針對上述問題，本研究構(gòu)筑了基于Fe3+還原能力、DPPH·和ABTS·+清除能力的可見分光光度抗氧化評價體系和基于活性氧(H2O2、OH·和O2·-)清除的化學(xué)發(fā)光抗氧化評價體系，比較了不同市售FPZ水提物(WEs)和醇提物(AEs)的抗氧化能力，探討了它們的抗氧化機制;通過醇提物HPLC圖譜體系的建立及與其抗氧化活性的相關(guān)性分析，確定了醇提物起抗氧化作用的主要物質(zhì)類型;通過水提物糖含量與抗氧化活性

3、的相關(guān)性分析，確定了糖含量高低與水提物抗氧化活性的關(guān)系;通過顯微特征非腺毛個數(shù)與抗氧化活性的相關(guān)性分析，確定了抗氧化性能與非腺毛顯微特征常數(shù)的關(guān)系。本研究所獲結(jié)果對于覆盆子抗氧化機制及其活性物質(zhì)的篩選具有積極意義。具體研究內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　 (1)覆盆子抗氧化活性評價體系的構(gòu)建及抗氧化活性研究
　　 基于抗氧化劑將K3[Fe(CN)6]、DPPH·和ABTS·+還原而引起溶液顏色的變化，構(gòu)建了Fe3+還原能力(FRA

4、P)、DPPH·清除能力(ScDPPH·)和ABTS·+清除能力(ScABTS·+)的分光光度法抗氧化評價體系;H2O2、鄰苯三酚自氧化產(chǎn)生的O2·-、Cu2+與H2O2發(fā)生Fetion反應(yīng)產(chǎn)生的HO·可分別將Luminol氧化產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，而抗氧化劑的加入會清除活性氧，從而引起發(fā)光值降低，基于此建立了活性氧清除能力(ScH2O2、ScO2·-、ScHO·)的Luminol-H2O2、Luminol-鄰苯三酚-NaOH和Luminol-

5、CuSO4-H2O2化學(xué)發(fā)光抗氧化評價體系。以11個市售FPZ為對象，制備了FPZ的水提物(WEs)和醇提物(AEs)，分別采用上述方法測定其抗氧化性能，求得其IC50(HDW)。結(jié)果表明，AEs和WEs的抗氧化機制均以Fe3+還原能力和對HO·的清除能力為主導(dǎo)，且AEs的抗氧化性能遠遠優(yōu)于WEs。
　　 (2)覆盆子化學(xué)成分的測定及其與抗氧化活性的相關(guān)性研究
　　 WEs中的主要活性物質(zhì)為多糖和糖蛋白，采用硫酸-苯酚法

6、測定其中的糖含量，并與WEs抗氧化能力進行相關(guān)性分析，結(jié)果表明在置信度為95％時，糖含量與WEs的EC50(FRAP)、IC50(ScDPPH·)、IC50(ScABTS·+)、IC50(ScH2O2)均呈顯著負相關(guān)、高相關(guān)(R=-0.882，-0.752，-0.882，-0.709)。
　　 AEs中的主要活性成分為黃酮及其苷類化合物，采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法測定其中的總黃酮，并與抗氧化能力進行相關(guān)性分析，

7、表明總黃酮含量與AEs的IC50(ScDPPH·)呈極顯著負相關(guān)、高相關(guān)(R=-0.818，P=0.002)。
　　 以KromasilC18柱(250mm×4.6mm，5.0μm)為固定相，乙腈和1％甲酸為流動相，梯度洗脫，建立了AEs的HPLC分析法。用該法對11個AEs樣品分析，獲得17個共有峰，經(jīng)主成分分析獲得4個主成分可以代表17個峰90％的信息。將主成分得分與AEs的抗氧化活性進行相關(guān)性分析，并經(jīng)色譜比對發(fā)現(xiàn):AEs

8、產(chǎn)生ABTS·+、DPPH·、O2·-、HO·清除能力的主要物質(zhì)為黃酮及其苷類;而強保留組分過多則會抑制AEs的Fe3+還原能力和對H2O2清除能力。
　　 (3)覆盆子顯微特征常數(shù)的測定及其與抗氧化活性的相關(guān)性研究
　　 藥材的顯微特征常數(shù)(MCC)的差異與化學(xué)成分含量和藥效間的相關(guān)性是中藥分析的新熱點。將容量分析法與顯微鑒定法相結(jié)合，建立了MCC的測定方法，以非腺毛為MCC測定的依據(jù)。非腺毛MCC與WEs的提取量和糖