棕櫚酸和硬脂酸對(duì)HepG2細(xì)胞血紅素加氧酶-1和核轉(zhuǎn)錄因子Nrf2表達(dá)的影響.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一類(lèi)與脂質(zhì)過(guò)氧化、胰島素抵抗以及許多遺傳易感因素密切相關(guān)的代謝應(yīng)激性肝臟損傷性疾病。發(fā)生NAFLD時(shí)常伴隨脂肪酸代謝異常，同時(shí)脂質(zhì)代謝紊亂又是NAFLD的特征性表現(xiàn)，飽和脂肪酸棕櫚酸(PA)和硬脂酸(SA)具有重要的生理功能，攝入適量具有調(diào)節(jié)肝臟脂質(zhì)代謝，通過(guò)抑制氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)來(lái)預(yù)防或治療NAFLD作用。
　　Nrf2是細(xì)胞抗氧化應(yīng)激反應(yīng)的關(guān)鍵因子，與抗氧化反應(yīng)元件(ARE)相互作用，在細(xì)胞核

2、內(nèi)形成Keap1-Nrf2/ARE通路，誘導(dǎo)編碼抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶的表達(dá)，在抗腫瘤、抗應(yīng)激、調(diào)節(jié)GSH合成、抗凋亡、抗炎癥反應(yīng)、神經(jīng)保護(hù)等方面發(fā)揮著廣泛的細(xì)胞保護(hù)功能，同時(shí)，Nrf2介導(dǎo)的抗氧化防御系統(tǒng)參與許多藥物的代謝、解毒和運(yùn)輸。血紅素氧合酶-1(HO-1)是Nrf2調(diào)控的下游靶基因之一，是機(jī)體重要的抗氧化應(yīng)激酶，通過(guò)增加肝細(xì)胞的抗氧化應(yīng)激能力，減輕肝臟損傷并在一定程度上延遲甚至是阻止非酒精性脂肪性肝炎的發(fā)生。
　　本試驗(yàn)采

3、用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將Nrf2表達(dá)質(zhì)粒和Nrf2-siRNA按其最適濃度瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入HepG2細(xì)胞中，構(gòu)建穩(wěn)定的Nrf2基因過(guò)表達(dá)和沉默模型。觀察Nrf2增量和減量表達(dá)時(shí)，PA和SA作用HepG2細(xì)胞后，HO-1的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)量的變化。明確PA和SA刺激HepG2細(xì)胞后，Nrf2及其代謝酶HO-1的相關(guān)性。
　　經(jīng)MTT法篩選確定PA和SA的誘導(dǎo)濃度為0.25 mM、0.5 mM、0.75 mM和1 mM。在1mmol/L濃度范圍

4、內(nèi)，與對(duì)照組相比，PA和SA作用HepG2細(xì)胞后Nrf2和HO-1 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)量均顯著增加（P＜0.05），其中PA對(duì)Nrf2和HO-1 mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)呈濃度依賴(lài)性，而SA對(duì)Nrf2和HO-1 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)呈先增加后減少的趨勢(shì)。Nrf2過(guò)表達(dá)后，隨PA和SA濃度變化，HO-1mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)量顯著升高（P＜0.05）;而Nrf2沉默后，不同濃度PA和SA對(duì)HO-1mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)量沒(méi)有影響，并不受PA和