羅非魚無乳鏈球菌的分離、鑒定及重組表面免疫原性蛋白His-Sip的免疫效果初步研究.pdf

1、上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文羅非魚無乳鏈球菌的分離、鑒定及重組表面免疫原性蛋白HisSip的免疫效果初步研究姓名：黎炯申請學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖指導(dǎo)教師：葉星20110623上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文》‘；中毒力最強(qiáng)的7株，進(jìn)行形態(tài)特征和主要理化特性分析，初步鑒定為’無乳鏈球菌(Streptococusagalactiae)。進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行分子鑒定，PCR擴(kuò)增16SrRNA基因和無乳鏈球菌特有GBSspecificgene咖(CAMP；

2、factor)基因的全長序列，BLAST分析顯示所有菌株的16SrRNA基因與iGenBank上登錄的無乳鏈球菌的相應(yīng)序列高度同源(998％)，各分離，，菌株間的16SrRNA基因序列也高度同源性(999％100％)。各菌株i間咖基因序列高度同源(100％)，與已知無乳鏈球菌的相應(yīng)序列也具j有高度同源性(99O％)。綜合生理生化與分子鑒定結(jié)果，可判定所分離的菌株為無乳鏈球菌。藥敏試驗(yàn)顯示，29種抗生素中13種為敏感，je7種為不敏感，9

3、種存在菌株間的差異。2雙重PCR快速鑒別無乳鏈球菌和海豚鏈球菌方法的建立無乳鏈球菌和海豚鏈球菌是魚類鏈球菌病常見的二種病原菌，所引發(fā)的病癥相似，難于根據(jù)病癥直接判斷病原菌。本研究根據(jù)無乳鏈：球菌的啪基因和海豚鏈球菌16SrRNA基因序列設(shè)計(jì)合成兩對(duì)引物，jj優(yōu)化擴(kuò)增條件，建立了快速鑒別無乳鏈球菌和海豚鏈球菌的雙重PCR10≈鍪方法。用該方法擴(kuò)增無乳鏈球菌和海豚鏈球菌后可分別獲得474bp和器霪296bp的特異性片段，擴(kuò)增嗜水氣單胞菌、銅