黑穗醋栗果實(shí)多糖的提取純化、結(jié)構(gòu)鑒定及生物活性的研究.pdf

1、黑穗醋栗(R.nigrum L.)俗稱黑豆果，是一種在黑龍江廣泛栽培的寒地特色小漿果，果實(shí)富含多糖，有機(jī)酸，類黃酮，花青素等多種活性物質(zhì)。
　　 本研究以黑穗醋栗果實(shí)為原料，對黑穗醋栗多糖提取工藝的條件進(jìn)行了系統(tǒng)的探討，并進(jìn)一步對多糖進(jìn)行了分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及生物活性的研究。為深入研究黑穗醋栗多糖的保健功效及其多糖產(chǎn)品的開發(fā)提供參依據(jù)。
　　 利用超聲波輔助法提取黑穗醋栗多糖，在單因素的基礎(chǔ)上采用響應(yīng)面分析法，以多糖提取

2、率為指標(biāo)，考察超聲時間、超聲功率、料液比三個因素對提取率的影響。確定最佳理論條件:超聲時間25.5 min，超聲功率402.2W，液料比20.3∶1 mL/g，此條件下理論預(yù)測多糖提取率為11.24％，實(shí)際操作條件:超聲時間25 min，超聲功率400W，液料比20∶1 mL/g。在此條件下多糖提取率11.19％，與預(yù)測值很接近。
　　 利用大孔樹脂對黑穗醋栗多糖進(jìn)行初步分離純化，通過靜態(tài)吸附與解吸動力學(xué)試驗(yàn)，從10種大孔樹脂中

3、選出D4006為黑穗醋栗多糖純化大孔樹脂。通過D4006對黑穗醋栗多糖動態(tài)吸附與解吸試驗(yàn)得到最佳條件:在25℃下，上樣濃度4.00 mg/mL，吸附流速1 mL/min,進(jìn)樣量30mL，洗脫劑為去離子水，洗脫流速1 mL/min，洗脫量100 mL。在此條件下得到黑穗醋栗多糖BCP純度可達(dá)55.9％，比未純化前的純度16.85％高出3.3倍，紫外光譜分析BCP顯示，在260 nm和280 nm均無核酸和蛋白質(zhì)吸收峰;在512nm處，無色

4、素峰?？梢奃4006大孔樹脂純化效果很好。
　　 將初步純化的BCP過葡聚糖凝膠SephadexG-100柱進(jìn)行分離純化，去離子水洗脫，得到三個組分，BCPⅠ、BCPⅡ、BCPⅢ。選取多糖含量較高的組分BCPⅡ富集，SephadexG-100柱層析、高效液相色譜和凍融試驗(yàn)進(jìn)行檢測，BCPⅡ是均一組分，分子量為5.188×104 Da，且純度可達(dá)90.81％。分離純化后的多糖BCPⅡ?yàn)榘咨鯛畹墓腆w，溶于熱水;不溶于乙醇、乙醚、丙

5、酮等有機(jī)溶劑;費(fèi)林試驗(yàn)、碘—碘化鉀反應(yīng)和考馬斯亮藍(lán)染色反應(yīng)均呈陰性，說明不含還原糖，淀粉和蛋白質(zhì);苯酚-硫酸和蒽酮-硫酸法、硫酸—咔唑顯色反應(yīng)陽性，表明存在多糖和糖醛酸。
　　 利用氣相色譜法對混合標(biāo)準(zhǔn)單糖和BCPⅡ糖腈乙酰化衍生物進(jìn)行分析，結(jié)果顯示BCPⅡ由葡萄糖、阿拉伯糖、甘露糖和半乳糖組成，其物質(zhì)量比為阿拉伯糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=2.36∶0.26∶4.1∶0.106。紅外光譜分析表明BCPⅡ是一種含有乙酰氨基結(jié)構(gòu)的

6、β型吡喃多糖。
　　 從清除超氧陰離子自由基、清除羥自由基、清除DPPH自由基3個方面研究了黑穗醋栗多糖的體外抗氧化活性;通過NBT還原實(shí)驗(yàn)、二羰基化合物測定實(shí)驗(yàn)、非酶糖基化終產(chǎn)物的熒光性測定實(shí)驗(yàn)，分別測定黑穗醋栗多糖對糖基化的干預(yù)作用。多糖濃度為1mg.mL-1時，對DPPH·清除率為46.20％，對OH·，O2-·的清除能力較強(qiáng)，其IC50分別為0.976 mg·mL-1，0.3931mg·mL-1。對非酶糖基化反應(yīng)三個階段