蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉末膠囊中活性成分分析及增強(qiáng)免疫力功能研究.pdf

1、以菌絲體為原料制成的保健品具有同天然蟲草相似的功效如免疫調(diào)節(jié)，抗腫瘤、抗氧化等，占據(jù)了很大的市場(chǎng)份額。蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉膠囊是從天然冬蟲夏草中分離出的無(wú)性型真菌“中國(guó)被毛孢”培育而成的菌絲體。但是從人工培育的菌絲體能否代替天然生長(zhǎng)的蟲草用于食療和藥用，而以菌絲體作為保健食品并沒(méi)有一個(gè)統(tǒng)一的質(zhì)量規(guī)范。因此本課題主要以粗多糖、腺苷、蟲草素、甘露醇等主要活性成分來(lái)制定該產(chǎn)品的檢測(cè)方法，測(cè)定活性成分的含量并進(jìn)行其增強(qiáng)免疫力功能研究。為蝙蝠蛾被

2、毛孢菌絲體粉末膠囊進(jìn)行質(zhì)量控制以及對(duì)保健食品的研究提供依據(jù)具有重要意義。課題研究?jī)?nèi)容主要包括兩大方面:
　　 一、蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉膠囊活性物質(zhì)含量測(cè)定研究
　　 1建立蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉末膠囊中粗多糖含量測(cè)定方法。
　　 方法:內(nèi)容物質(zhì)量體積比1∶100，沸水加熱1h，取續(xù)濾液85％乙醇沉淀，重復(fù)3次后，苯酚-硫酸法于480 nm處測(cè)定吸光度值。結(jié)果:平均加標(biāo)回收率為91.9％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.34％。<

3、br>　　 2建立建立了高效液相法-二極管陣列檢測(cè)器同時(shí)測(cè)定蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉膠囊中腺苷和蟲草素的測(cè)定方法。
　　 方法:室溫，以水為提取溶劑，質(zhì)量體積比(m/v)1∶40，超聲提取(超聲功率250W)45 min，離心，取上清液，定容，搖勻，過(guò)0.45μm濾膜;色譜柱Ultimate ColumnTM C18(4.6×250mm，5μm);流動(dòng)相:乙腈-水(5∶95，v/v);流速:1.0 mL/min;柱溫:25℃;檢測(cè)

4、波長(zhǎng):260nm;進(jìn)樣量:10μL。結(jié)果:腺苷平均回收率100.49％，RSD=1.93％;蟲草素平均回收率97.51％，RSD=4.71％。
　　 3建立高效液相法-ELSD測(cè)定蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉膠囊中甘露醇含量的方法。
　　 方法:室溫，質(zhì)量體積比1∶25，超聲水提90 min。色譜條件:氨基柱(Hypersil NH24.6 mm×300 mm，5μm)，流動(dòng)相:流動(dòng)相:乙腈-水(85∶15);流速:1.0 mL

5、/min;柱溫:30℃;漂移管溫度為70℃，載氣(N2)流速為2.72 mL/min，進(jìn)樣量20μL。結(jié)果:甘露醇平均回收率99.01％，RSD=3.52％，檢出限150μg/mL。
　　 4建立蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉膠囊中褪黑素含量的HPLC-MS測(cè)定方法。
　　 方法:以甲醇為提取溶劑，超聲波提取褪黑素的方法。色譜條件:色譜柱:ThermoBeta Basic-18(150 mm×4.6 mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇:

6、0.1％甲酸-水(60∶40);流速:0.6 mL/min;柱溫:40℃。用串聯(lián)離子阱質(zhì)譜在電噴霧電離正離子(ESI+)-二級(jí)質(zhì)譜(MS/MS)模式進(jìn)行質(zhì)譜測(cè)定。結(jié)果:方法的線性范圍為10～200μg/kg，基質(zhì)加標(biāo)工作曲線線性方程為y=-8575.85+10204.8x，相關(guān)系數(shù)r=0.9992。方法的定性檢出限為0.5μg/kg，定量檢出限為2.0μg/kg，平均加標(biāo)回收率為77.01％～85.02％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜10％。

7、　　 二、蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉膠囊增強(qiáng)免疫力功能研究
　　 對(duì)蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉膠囊進(jìn)行增強(qiáng)免疫力保健功能的試驗(yàn)研究，研究?jī)?nèi)容包括:碳廓清實(shí)驗(yàn)測(cè)定;遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)檢測(cè);抗體生成細(xì)胞和血清溶血素測(cè)定;小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（半體內(nèi)法）和臟器/體重比值;ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)和小鼠NK細(xì)胞活性測(cè)定（乳酸脫氫酶LDH測(cè)定法）。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（衛(wèi)生部2003）來(lái)判斷蝙蝠蛾被毛孢菌絲