PCR引發(fā)的mtDNAD環(huán)重復(fù)區(qū)假異質(zhì)性及其機(jī)制的研究.pdf

1、本文采用了PCR方法，研究了藍(lán)狐(Alopexlagopus)、黑熊(Selenarctosthibetanus)、棕熊(Ursusarctos)、狗(Canisfamiliaris)、狼(Canislupus)、虎(Panheratigris)的相應(yīng)區(qū)域。結(jié)果顯示，在藍(lán)狐、黑熊、棕熊、狗和狼，無(wú)論以總DNA為模板，還是以PAGE電泳純化的擴(kuò)增產(chǎn)物或克隆質(zhì)粒為模板，擴(kuò)增產(chǎn)物在8％PAGE膠上都表現(xiàn)為梯狀譜帶，相鄰條帶之間相差1個(gè)重復(fù)單位

2、。說(shuō)明這種梯狀譜帶是一種PCR引發(fā)的假異質(zhì)性。進(jìn)一步研究顯示，這種假異質(zhì)性與引物無(wú)關(guān)，在一定程度上受DNA聚合酶種類(lèi)的影響，但不能被消除。虎在上述實(shí)驗(yàn)中均不出現(xiàn)梯狀譜帶。通過(guò)RNAstructurev3.7軟件對(duì)上述物種重復(fù)區(qū)序列的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，不同的重復(fù)序列可以產(chǎn)生不同的周期性二級(jí)結(jié)構(gòu)，當(dāng)新鏈延伸到達(dá)這樣的結(jié)構(gòu)時(shí)，DNA聚合酶就有可能與該高級(jí)結(jié)構(gòu)的雙鏈位置結(jié)合，而新生鏈起到引物作用，使聚合酶有機(jī)會(huì)將鏈的延伸越過(guò)一個(gè)或幾個(gè)重復(fù)單位，