LMP-1基因修飾BMSCs復(fù)合納米羥基磷灰石-聚酰胺66接骨板治療犬股骨骨折的實驗研究.pdf

1、背景：骨折治療通常采用鋼板、螺釘內(nèi)固定，其費用昂貴，無生物活性且彈性模量太高，易造成應(yīng)力遮擋、骨吸收，引起骨折愈合速度和能力下降；且骨折愈合后還需要再次手術(shù)取出內(nèi)固定物，不僅增加了病人的治療費用，還增加了病人的痛苦。部分病人還可能發(fā)生骨折不愈合、骨缺損，需要再次手術(shù)植骨。為此，尋找一種既能固定骨折、縮短骨折愈合時間，又能防治骨不連，還可避免二次手術(shù)取出的生物固定材料是許多骨科醫(yī)生的夢想。
　　目的：研究轉(zhuǎn)染LIM礦化蛋白-1(LI

2、M mineralization protein-1，LMP-1)基因的骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)在裸鼠股后肌內(nèi)的成骨作用及轉(zhuǎn)染LMP-1基因的BMSCs復(fù)合納米羥基磷灰石/聚酰胺66(nano-hydroxyapatite/polyamide66)接骨板治療犬股骨骨折的可行性和效果。
　　方法：采用密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)的方法從犬骨髓中分離，培養(yǎng)，擴增犬骨髓間充質(zhì)干細胞，

3、以含LMP-1基因的腺病毒感染BMSCs，觀察腺病毒感染前后BMSCs的形態(tài)特點。裸鼠股后肌內(nèi)的成骨實驗分為3組：LMP-1轉(zhuǎn)染細胞組，空載腺病毒轉(zhuǎn)染細胞組，未轉(zhuǎn)染細胞組。分別將各組細胞懸液注入裸鼠股后部肌內(nèi)。分期進行X線和組織學檢查，評價LMP-1基因的成骨能力。用攜帶LMP-1基因的重組腺病毒(Ad-LMP-1)轉(zhuǎn)染BMSCs后與n-HA/PA66接骨板及螺釘共同培養(yǎng)，倒置顯微鏡及掃描電鏡觀察細胞在接骨板上粘附、生長情況。建立犬右側(cè)

4、股骨中段橫行骨折模型。骨折切開復(fù)位內(nèi)固定實驗分為4組：LMP-1轉(zhuǎn)染細胞組，未轉(zhuǎn)染細胞組，單純n-HA/PA66組和鋼板螺釘組，每組12個樣本。于術(shù)后4、6、8、10、12周進行X線檢測，12周取材進行大體觀察、組織學觀察及掃描電鏡觀察。
　　結(jié)果：1.成功從犬骨髓中分離出骨髓間充質(zhì)干細胞，經(jīng)腺病毒轉(zhuǎn)染后其形態(tài)特征及生長特性未見顯著變化。2.裸鼠肌內(nèi)成骨實驗表明：LMP-1轉(zhuǎn)染細胞組在裸鼠肌內(nèi)可形成明顯骨組織，空載腺病毒轉(zhuǎn)染細胞組

5、和未轉(zhuǎn)染細胞組僅見纖維組織形成或微量成骨。3.n-HA/PA66接骨板有良好的生物相容性，掃描電鏡觀察到經(jīng)Ad-LMP-1轉(zhuǎn)染的BMSCs在材料板上生長良好。4.犬股骨中段骨折動物實驗表明：術(shù)后后8周及術(shù)后12周轉(zhuǎn)染組內(nèi)固定失敗率均低于未轉(zhuǎn)染組和接骨板組(P<0.05)，而與鋼板螺釘組無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。轉(zhuǎn)染組骨折愈合時間明顯短于其余三組。術(shù)后12周轉(zhuǎn)染組材料板及螺釘與犬股骨完全融合，材料與骨干間有明顯新骨生成。未轉(zhuǎn)染組和n-