800nm半導(dǎo)體激光對(duì)皮膚黑頭及毛孔粗大治療機(jī)制的探討及臨床效果觀察.pdf

1、黑頭及毛孔粗大嚴(yán)重影響顏面部美觀，降低患者的生活信心。引起面部皮膚毛孔粗大三個(gè)最主要的臨床病因，即高皮脂排泄因素，毛孔周圍皮膚彈性減低因素，和毛囊容量增大因素。考慮可能引起的面部皮膚毛孔粗大的不同原因，對(duì)每一個(gè)患者的治療方法的選擇必須是個(gè)體化的。傳統(tǒng)應(yīng)用粉刺針挑出及維甲酸類、水楊酸類外用藥進(jìn)行治療，但對(duì)某些黑頭，常規(guī)清潔產(chǎn)品無(wú)效，也有應(yīng)用調(diào)Q Nd:YAG及點(diǎn)陣激光治療黑頭及毛孔粗大的研究，均取得一定效果，但是改善有限，且效果不能達(dá)到持

2、久穩(wěn)定。
　　鼻部黑頭及毛孔粗大患者，鼻部毛囊及皮脂腺細(xì)胞在真皮層過(guò)度聚集，細(xì)胞增殖與凋亡的調(diào)節(jié)紊亂被認(rèn)為在鼻部皮膚黑頭及毛孔粗大患者的發(fā)病機(jī)制和進(jìn)展中起著關(guān)鍵的作用。即皮膚皮脂腺細(xì)胞、皮脂腺細(xì)胞的增值細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)的增殖與凋亡的失衡，可能是決定鼻部黑頭及毛孔粗大發(fā)展的重要因素。凋亡過(guò)程是由多種基因嚴(yán)格控制的，包括癌基因、抑癌基因和病毒基因，這些基因如

3、Bcl-2家族、caspase家族、癌基因如C-myc、抑癌基因如P53等，Bcl-2家族是研究最早的凋亡相關(guān)基因，Bcl-2、Bcl-xl、Mcl和A1基因?qū)儆诳沟蛲龌?，bax、bak和bcl-xS屬于促凋亡基因。目前認(rèn)為細(xì)胞凋亡可能主要存在3條信號(hào)傳導(dǎo)途徑，第1條為細(xì)胞凋亡的死亡受體途徑，第2條為線粒體途徑，第3條為p53基因依賴的調(diào)控途徑。Caspase-3是凋亡執(zhí)行因子，觸發(fā)后可引起下游酶的級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)，它的活化使凋亡進(jìn)入不可

4、逆階段，與核改變相關(guān)，是最重要的下游效應(yīng)蛋白酶。在細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中，Bcl-2家族是凋亡調(diào)控的關(guān)鍵因素，其家族成員在其內(nèi)部的構(gòu)成比例非常重要，尤其是Bcl-2/Bax的比率，Bcl-2/Bax比率下降是啟動(dòng)細(xì)胞凋亡程序的分子開(kāi)關(guān)。細(xì)胞凋亡的發(fā)生與Bcl-2和Bax形成同源二聚體或形成異源二聚體調(diào)節(jié)有關(guān)，當(dāng)Bcl-2和Bax形成同源二聚體時(shí)能夠誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，Bcl-2和Bax形成異源二聚體時(shí)能夠抑制細(xì)胞發(fā)生凋亡。近年對(duì)光照或激

5、光誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究越來(lái)越多，脈沖染料激光、二氧化碳點(diǎn)陣激光、He-Ne激光等均有報(bào)道具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。
　　800nm半導(dǎo)體激光隨著長(zhǎng)時(shí)間的臨床應(yīng)用，安全性高、副作用小，逐漸被廣泛擴(kuò)展到皮膚美容的多個(gè)領(lǐng)域，并被證實(shí)是有效的。觀察應(yīng)用800nm半導(dǎo)體激光對(duì)黑毛豚鼠皮膚毛囊及皮脂腺作用的影響，皆在為臨床治療皮膚黑頭及毛孔粗大提供理論依據(jù)。國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)道使用800nm半導(dǎo)體激光治療黑頭及毛孔粗大的實(shí)驗(yàn)研究。
　　第一部分：

6、800nm半導(dǎo)體激光照射對(duì)黑毛豚鼠皮膚毛囊及皮脂腺形態(tài)學(xué)的影響及增殖細(xì)胞核抗原的改變
　　目的：研究800nm半導(dǎo)體激光照射對(duì)黑毛豚鼠皮膚毛囊及皮脂腺病理組織的改變及對(duì)皮脂腺細(xì)胞的增值細(xì)胞核抗原(PCNA)蛋白作用的影響。
　　方法：雄性短毛系豚鼠24只，均勻涂布煤焦油混懸液并在豚鼠背部形成8cm×3cm的實(shí)驗(yàn)區(qū)域。分為四組：正常對(duì)照組(NC)、低劑量800nm半導(dǎo)體激光治療組(L-LS)、高劑量800nm半導(dǎo)體激光治療組(

7、H-LS)、調(diào)Q Nd:YAG治療組(QC)。分別于術(shù)后1d、7d、14d天取材。HE染色觀察表皮、真皮、皮脂腺變化及毛囊損傷情況，免疫組化方法檢測(cè)皮脂腺細(xì)胞的增值細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)。
　　結(jié)果：HE染色結(jié)果顯示，800nm半導(dǎo)體激光及調(diào)Q Nd:YAG激光治療后，與正常對(duì)照組比較：均發(fā)生毛囊扭曲變形，退行性變、毛乳頭和毛球分離，表皮層下方及毛囊周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，真皮層膠原纖維腫脹未見(jiàn)斷裂，14d可見(jiàn)毛囊上皮變薄，毛囊及

8、皮脂腺存在數(shù)量減少，體積減小，炎性細(xì)胞減少，形態(tài)恢復(fù)正常。以高劑量Light Sheer Duet800nm半導(dǎo)體激光組毛囊及皮脂腺減少最為明顯。
　　免疫組織化學(xué)染色顯示，黑毛豚鼠背部皮膚組織PCNA陽(yáng)性顆粒主要分布在表皮基底層細(xì)胞、毛囊上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞核中，在各時(shí)間段，黑毛豚鼠背部皮膚組織 PCNA表達(dá)陽(yáng)性顆粒均以 NC組(1d32.6±5.5％、7d33.5±5.4%、14d32.7±5.3%)最高，其次L-LS(1

9、d25.5±6.3%、7d23.2±6.2%、14d21.7±6.0%)組和QC組(1d15.4±4.5%、7d14.3±4.6%、14d12.8±4.8%)，H-LS(1d11.2±4.7%、7d8.6±4.2%、14d6.3±4.3%)組最低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1d F=12.304、7d F=13.655、14d F=15.234, P＜0.001)。且在第1天至第14天均隨時(shí)間延長(zhǎng)而減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。<

10、br>　　以上結(jié)果表明，Light Sheer Duet800nm半導(dǎo)體激光治療能夠有效減少黑毛豚鼠皮膚毛囊及皮脂腺數(shù)量和體積，且不會(huì)導(dǎo)致表皮損傷和真皮彈性纖維斷裂，Light Sheer Duet800nm半導(dǎo)體激光高能量治療組優(yōu)于低能量組和調(diào)Q激光治療組。
　　第二部分：800nm半導(dǎo)體激光照射對(duì)黑毛豚鼠皮膚皮脂腺細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的影響
　　目的：研究800nm半導(dǎo)體激光照射對(duì)黑毛豚鼠皮膚細(xì)胞凋亡及caspase-3、B

11、ax、Bcl-2蛋白表達(dá)的影響。
　　方法：雄性短毛系豚鼠24只，均勻涂布煤焦油混懸液并在豚鼠背部形成8cm×3cm的實(shí)驗(yàn)區(qū)域。分為四組：正常對(duì)照組(NC)、低劑量800nm半導(dǎo)體激光治療組(L-LS)、高劑量800nm半導(dǎo)體激光治療組(H-LS)、調(diào)Q Nd:YAG治療組(QC)。分別于術(shù)后1d、7d、14d天取材。采用TUNEL法檢測(cè)黑毛豚鼠背部皮膚皮脂腺細(xì)胞凋亡，采用 western-blot法檢測(cè)caspase-3、Bax

12、、Bcl-2的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：TUNEL法檢測(cè)黑毛豚鼠皮膚皮脂腺細(xì)胞凋亡顯示，棕黃染色TUNEL(+)細(xì)胞， TUNEL(+)細(xì)胞主要分布在表皮基底層、毛囊上皮層及間質(zhì)層。NC組(1d0.5±0.1%、7d0.4±0.1%、14d0.6±0.2%)黑毛豚鼠背部皮膚組織細(xì)胞凋亡的比率最低，其次L-LS(1d6.7±1.2%、7d7.6±1.3%、14d8.2±1.5%)組和QC組(1d8.2±2.0%、7d9.3±2.2%、1

13、4d10.2±2.3%)，H-LS(1d13.6±3.4%、7d15.8±3.5%、14d17.2±3.6%)組TUNEL(+)細(xì)胞最高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1d F=10.235、7d F=11.527、14d F=14.520, P＜0.001)。且在第1天至第14天均隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　Western blot法檢測(cè)黑毛豚鼠皮膚caspase-3蛋白表達(dá)水平，caspase-3蛋白質(zhì)表

14、達(dá)量與內(nèi)參照GAPDH表達(dá)量進(jìn)行對(duì)比，為蛋白質(zhì)的相對(duì)表達(dá)水平。NC組(1d0.21±0.06、7d0.22±0.05、14d0.20±0.07)黑毛豚鼠背部皮膚組織caspase-3的蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)水平最低，在各時(shí)間段，給予激光治療均可上調(diào)caspase-3的蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)水平，以H-LS組caspase-3的蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)水平最高(1d0.47±0.13、7d0.50±0.16、14d0.55±0.18)，其次QC組caspase-3

15、的蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)水平較高(1d0.44±0.20、7d0.48±0.21、14d0.52±0.24)，而后為L(zhǎng)-LS組(1d0.42±0.10、7d0.46±0.12、14d0.50±0.14),各組與NC組對(duì)照差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1d F=8.632、7d F=9.203、14d F=9.624, P＜0.001)。L-LS組、H-LS組和QC組的caspase-3的蛋白表達(dá)水平在第1天至第14天均隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

16、(P＜0.05)。
　　在各時(shí)間段，給予激光照射治療均可上調(diào)Bax及下調(diào)Bcl-2的蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)水平，以Light Sheer Duet800nm半導(dǎo)體激光高能量(H-LS)治療組Bax的蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)水平最高，Bcl-2的蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)水平最低， Bcl-2/Bax的比值最低。其次QC組上調(diào)Bax及下調(diào)Bcl-2水平較高，而后為L(zhǎng)-LS組，NC組(Bax1d0.15±0.04、7d0.16±0.03、Bcl-214d0.14±

17、0.05；1d0.23±0.08、7d0.24±0.06、14d0.23±0.07)最低。1d時(shí)：L-LS組黑毛豚鼠背部皮膚組織Bax的蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)為0.36±0.10、Bcl-2為0.16±0.10；QC組的Bax為0.40±0.21、Bcl-2為0.14±0.05；H-LS組Bax為0.42±0.14、Bcl-2為0.10±0.03，與NC組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Bax F=9.032 P＜0.001;Bcl-2 F=9.562

18、 P＜0.001)；7d時(shí)：L-LS組黑毛豚鼠背部皮膚組織Bax的蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)為0.40±0.13、Bcl-2為0.18±0.06；QC組的Bax為0.43±0.22、Bcl-2為0.16±0.06；H-LS組的Bax為0.46±0.13、Bcl-2為0.12±0.04，與NC組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Bax F=9.421 P＜0.001;Bcl-2 F=9.624 P＜0.001)；14d時(shí)：L-LS組黑毛豚鼠背部皮膚組織Bax的

19、蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)為0.43±0.11、Bcl-2為0.20±0.09；QC組為 Bax為0.45±0.23、Bcl-2為0.18±0.05；H-LS組的Bax為0.49±0.16、Bcl-2為0.14±0.04，與NC組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Bax F=9.637 P＜0.001;Bcl-2 F=9.758 P＜0.001)。L-LS組、H-LS組和QC組的上調(diào)Bax及下調(diào)Bcl-2水平在第1天至第14天均隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，差異均有統(tǒng)

20、計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　以上結(jié)果表明，Light Sheer Duet800nm半導(dǎo)體激光照射，通過(guò)上調(diào)Bax及下調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)水平，且Bcl-2/Bax比率降低，上調(diào)了caspase-3的激活，并促進(jìn)了黑毛豚鼠背部皮膚皮脂腺細(xì)胞的凋亡。
　　第三部分：800nm半導(dǎo)體激光照射改善鼻部黑頭及毛孔粗大的療效研究
　　目的：對(duì)800nm半導(dǎo)體激光照射治療鼻部黑頭及毛孔粗大的效果、滿意度及安全性評(píng)價(jià)。
　

21、　方法：本次研究共招募60名志愿者，所有志愿者鼻頭或鼻翼位置均出現(xiàn)不同程度的毛孔粗大和黑頭現(xiàn)象。采用Light Sheer Duet800nm半導(dǎo)體激光ET手具治療的觀察組患者共30例；調(diào)Q Nd:YAG治療對(duì)照組患者共30例。進(jìn)行面部毛孔粗大評(píng)分(enlarged facial pores score，EFPS)。應(yīng)用CANON D8000單反相機(jī)分別對(duì)觀察組及對(duì)照組志愿者治療前后鼻部正面及鼻翼兩側(cè)的黑頭及毛孔，使用偏振光UV鏡，拍攝

22、微距照片。并根據(jù)照片所見(jiàn)毛孔的大小、密度、深淺等不同進(jìn)行判定，對(duì)患者鼻部黑頭及毛孔粗大程度按1-6級(jí)進(jìn)行分級(jí)診斷，測(cè)定鼻尖及鼻翼兩部位黑頭及毛孔粗大治療前后平均級(jí)差。改善率=(治療前評(píng)級(jí)-治療后評(píng)級(jí))/治療前評(píng)級(jí)×100%。改善率=顯著改善率+有效改善率。在療程結(jié)束之后由患者對(duì)自身鼻頭毛孔粗大、黑頭現(xiàn)象的改善情況進(jìn)行主觀評(píng)價(jià)，標(biāo)準(zhǔn)分為很滿意、滿意和不滿意三個(gè)等級(jí)，而滿意率則為非常滿意率與滿意率之和。不良反應(yīng)發(fā)生率的評(píng)判指標(biāo)，包含表皮脫痂

23、期、紅斑期和疼痛腫脹期等。采用視覺(jué)模擬評(píng)分VAS(visual analogue scale)評(píng)估志愿者的疼痛程度。最痛為10分，無(wú)痛為0分，治療結(jié)束后志愿者根據(jù)自己的疼痛情況選擇評(píng)分。
　　結(jié)果：采用800nm半導(dǎo)體激光ET手具治療的觀察組患者和采用調(diào)Q Nd:YAG治療的對(duì)照組患者治療前后均進(jìn)行面部毛孔粗大評(píng)分。觀察組志愿者的鼻頭毛孔粗大和黑頭改善率為93.3%，對(duì)照組志愿者則為76.7%，差異明顯(P<0.05)。
　

24、　觀察組和對(duì)照組志愿者在結(jié)束治療之后分別從恢復(fù)情況、醫(yī)生治療技術(shù)、服務(wù)態(tài)度等多方面進(jìn)行評(píng)估，滿分為100分。對(duì)照組志愿者中有10例非常滿意，占比33.3%；11例滿意，占比36.7%；9例不滿意占比30.3%；總滿意度為70.0%。觀察組志愿者中有17例非常滿意，10例滿意，3例不滿意，占比分別為56.7%、33.3%和10.0%；總滿意度為90.0%。由此看出兩組志愿者對(duì)于治療結(jié)果滿意度方面差異較大，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。<

25、br>　　兩組志愿者治療后，所有志愿者治療結(jié)束后均未出現(xiàn)瘢痕和皮膚色素減退現(xiàn)象。觀察組志愿者治療后的疼痛評(píng)分和紅斑持續(xù)時(shí)間、腫脹持續(xù)時(shí)間等明顯優(yōu)于對(duì)照組患者，差異顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。但兩組志愿者的表皮脫痂期持續(xù)時(shí)間相差不大，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　以上結(jié)果表明，采用800nm半導(dǎo)體激光照射治療鼻頭黑頭及毛孔粗大的改善率優(yōu)于調(diào)Q Nd:YAG激光治療，副反應(yīng)發(fā)生率低于調(diào)Q Nd:YAG激光治療。
　　

26、結(jié)論：
　　1、 Light Sheer Duet800nm半導(dǎo)體激光照射治療能夠有效減少黑毛豚鼠皮膚毛囊及皮脂腺數(shù)量和體積，且不會(huì)導(dǎo)致表皮損傷和真皮彈性纖維斷裂，Light Sheer Duet800nm半導(dǎo)體激光高能量治療組優(yōu)于低能量組和調(diào)Q激光治療組。
　　2、 Light Sheer Duet800nm半導(dǎo)體激光照射，通過(guò)上調(diào)Bax及下調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)水平，且Bcl-2/Bax比率降低，上調(diào)了caspase-3的