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1、目的:探討小鼠單核細(xì)胞RAW264.7能否在RANKL誘導(dǎo)下向破骨細(xì)胞成熟分化。
方法:RANKL作用RAW264.7細(xì)胞9天～15天,光鏡、透射電鏡、掃描電鏡(scanning electron microscope,SEM)分別觀察其細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色法觀察TRAP陽性的多核細(xì)胞,RT-PCR檢測(cè)破骨細(xì)胞表型和功能
2、基因表達(dá)變化情況,掃描電鏡觀察破骨細(xì)胞在骨片上形成骨吸收陷窩。
結(jié)果:光鏡、透射電鏡下可見細(xì)胞胞體增大,為橢圓形或不規(guī)則形,胞核5～10個(gè),掃描電鏡下可見細(xì)胞表面大量的偽足樣突起;此外,RANKL能誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞分化為TRAP染色陽性的多核破骨細(xì)胞,細(xì)胞多為超過5個(gè)核的多核巨細(xì)胞;RAW264.7細(xì)胞成熟分化后具有骨吸收功能,并且能上調(diào)Cathepsin-K、TRAP、RANK等典型破骨細(xì)胞表型和功能基因mRNA
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