CD11a-CD18在高壓電燒傷中動態(tài)變化及已酮可可堿、烏司他丁干預的實驗研究.pdf

1、背景：由張慶富主任創(chuàng)建的河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院電燒傷微循環(huán)實驗室開展的前期動物試驗研究發(fā)現高壓電燒傷后動物的深筋膜、胃粘膜、腸粘膜、腸系膜、肝臟、腎臟等存在明顯的微循環(huán)紊亂，不僅表現在局部組織器官，而且還引起遠隔組織器官的微循環(huán)紊亂。白細胞活化是燒傷后微循環(huán)障礙的關鍵改變，其中白細胞粘附又是其核心步驟；介導白細胞粘附的主要粘附分子為細胞間黏附分子-1(ICAM-1)和淋巴細胞功能相關抗原-1(LFA-1)即CD11a/CD18及巨噬細胞表

2、面抗原-1(Mac-1)。以往的實驗研究揭示了sICAM-1與CD11b/CD18在高壓電燒傷后微循環(huán)紊亂的機制，而對淋巴細胞功能相關抗原-1(LFA-1)即CD11a/CD18的研究還較少，我們本次設計的實驗，就旨在進一步觀察和闡述CD11a/CD18在高壓電燒傷后微循環(huán)障礙中的作用機制。
　　目的：旨在通過觀察高壓電燒傷早期大鼠白細胞膜上CD11a/CD18陽性表達的連續(xù)變化，進一步探討高壓電擊傷微循環(huán)紊亂的機制，及己酮可可堿

3、和烏司他丁對整合素家族中CD11a/CD18黏附分子表達的干預，為高壓電燒傷的臨床治療提供理論依據和指導。
　　方法：
　　1實驗動物分組：成年健康SD大鼠240只，隨機分成四組，每組各60只，分別為假高壓電燒傷組(對照組)、高壓電燒傷實驗組(實驗組)、高壓電燒傷己酮可可堿(PTX)治療組(PTX治療組)及高壓電燒傷烏司他丁(UTI)治療組(UTI治療組)。每一組又分為6個不同時相，即電擊前(T0)、電擊即刻(10min內)

4、(T1)、傷后1小時(T2)、2小時(T3)、4小時(T4)、8小時(T5)，每時相各10只。各組予以編號，分籠飼養(yǎng)。
　　2實驗前準備：對大鼠稱重，并按編號記錄在冊。剃除大鼠左上肢、右下肢及胸部被毛。將大鼠置于室溫(24-26℃)和濕度(35-45％RH)相對恒定的實驗室中，保溫，禁食，自由飲水，過夜。根據實驗要求，配置實驗藥品濃度。
　　3模型復制：電擊前麻醉大鼠，將大鼠逮入塑料瓶式麻醉床，腹腔注射麻藥，按1％戊巴比妥鈉

5、溶液3 ml/kg或40mg/公斤劑量注射。連接變壓器、調壓器與實驗操作臺，將麻醉成功的大鼠放置于高壓輸出電路之間，左上肢為電流入口，右下肢為出口，接通電源調整變壓器輸出電壓1千伏，電擊三秒鐘后斷電，電極夾接觸局部組織形成三度燒傷創(chuàng)面，大鼠生命體征存在，高壓電燒傷試驗動物模型復制成功。對照組給予假電，治療1組在電擊后即刻腹腔注射PTX(50mg/Kg劑量)，治療2組在電擊后即刻腹腔注射UTI(2萬單位/kg)。
　　4標本采集與處

6、理：在不同的時相，將復制成功高壓電燒傷大鼠模型麻醉后開胸，直視下心臟取血，收集1.0ml全血置于乙二胺四乙酸二鉀(EDTA·K2)抗凝管，混勻。將標本去除紅細胞，標記免疫熒光單克隆抗體，制成白細胞懸液待檢。
　　5指標檢測：采用流式細胞儀進行檢測電燒傷早期不同時相白細胞膜上CD11a/CD18的陽性表達(％)。
　　6實驗數據處理：應用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析處理，實驗數據均以均數±標準差(x±s)表示，采用完

7、全隨機的兩因素析因設計定量資料的方差分析(ANOVA)，p<0.05為有顯著性差異。
　　結果：
　　白細胞膜上CD11a/CD18的陽性表達變化：
　　(1)對照組內各時相白細胞膜上CD11a/CD18陽性表達無顯著性差異(p>0.05)。
　　(2)實驗組T1、T2、T3、T4、T5時相白細胞膜上CD11a/CD18陽性表達均高于對照組的水平(p<0.05)；實驗組T0、T1、T2、T3、T4時相CD11a/

8、CD18陽性表達逐漸增高，到T4時相表達最高，T5時相CD11a/CD18表達較T4時相低；組內T0、T1、T2、T3、T4各時相CD11a/CD18表達比較有顯著性差異(p<0.05)，T4、T5兩時相CD11a/CD18表達無顯著性差異(p>0.05)。
　　(3)治療1組T1、T2、T3、T4、T5時相白細胞膜上CD11a/CD18陽性表達均高于對照組的水平(p<0.05)；治療1組T0、T1、T2、T3、T4、T5時相CD

9、11a/CD18陽性表達逐漸增高，到T5時相表達最高；組內T1、T2、T3、T4、T5時相間有顯著性差異(p<0.05)。
　　(4)治療2組T2、T3、T4、T5時相白細胞膜上CD11a/CD18陽性表達均高于對照組的水平(p<0.05)，T1時相與對照組之間無顯著性差異；治療2組T1、T2、T3、T4、T5時相CD11a/CD18陽性表達逐漸增高，到T5時相表達最高；組內T1和T2、T2和T3、T3和T4時相間有顯著性差異(p

10、<0.05)；組內T4和T5時相間CD11a/CD18陽性表達比較無顯著性差異(P>0.05)。
　　(5)治療1組與實驗組比較：治療1組T2、T3、T4、T5時相白細胞膜上CD11a/CD18的陽性表達低于實驗組(p<0.05)；電燒傷組與治療1組T1時相CD11a/CD18的陽性表達無顯著性差異(P>0.05)。
　　(6)治療2組與實驗組比較：治療2組T1、T2、T3、T4、T5時相白細胞膜上CD11a/CD18的陽性

11、表達低于實驗組(p<0.05)。
　　(7)治療組1和治療2組比較，兩組各個時相CD11a/CD18的陽性表達無顯著性差異(P>0.05)。
　　結論：
　　1高壓電燒傷早期實驗大鼠白細胞CD11a/CD18顯著增加，增加了白細胞的黏附，在微循環(huán)障礙中起到重要作用。
　　2高壓電燒傷早期己酮可可堿可下調白細胞膜上CD11c/CD18表達，從而抑制白細胞黏附，從而緩解微循環(huán)紊亂。
　　3高壓電燒傷早期烏司他丁