中空纖維細胞捕獲和液-固微萃取法及其對姜黃素類活性成分的研究.pdf

1、目的：
　　建立中空纖維細胞捕獲-高效液相色譜法(hollow fibre cell fishing with high performance liquid chromatography，HFCF-HPLC）、中空纖維液/固微萃取-高效液相色譜法（Hollow fibre liquid/solid phase microextraction with HPLC，HFL/SME-HPLC）和磁力攪拌子液/固微萃取-高效液相色譜法（

2、Stirrer-liquid/solid microextraction with HPLC，Stirrer-L/SME-HPLC），并利用這3種方法研究姜黃、郁金、莪術(shù)中姜黃素類活性成分，同時對HFL/SME和Stirrer-L/SME的萃取機理進行了分析和討論。
　　方法：
　　對中空纖維內(nèi)壁種植肝癌細胞HepG-2，卵巢癌細胞SKOV-3和腎癌細胞ACHN的生長狀態(tài)、細胞種植時間、甲醇濃度對細胞存活率的影響、纖維活性中

3、心或培養(yǎng)液對篩選結(jié)果的影響、陽性和陰性對照、篩選活性成分保留時間和相對峰面積的重現(xiàn)性等進行考察和優(yōu)化。在最佳HFCF-HPLC條件下，將種植3種癌細胞、填充3種癌細胞的細胞膜、細胞器以及相關(guān)的磷脂酶C受體的中空纖維，結(jié)合HPLC，對姜黃、郁金、莪術(shù)提取液中的姜黃素類化合物進行篩選和鑒定，探討姜黃素類活性成分在癌細胞上的結(jié)合部位以及其與作用靶點。對影響HFL/SME或Stirrer-L/SME偶合HPLC的萃取溶劑、樣品相的pH、鹽濃度、

4、萃取時間、攪拌速度和樣品相體積等因素進行條件優(yōu)化，對兩種方法的線性范圍等進行方法學考察。在最佳的HFL/SME-HPLC或Stirrer-L/SME-HPLC條件下，以姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素作為模型化合物，利用HFL/SME或Stirrer-L/SME結(jié)合HPLC對3種中藥中篩選出的姜黃素類活性成分進行分離、富集和測定。
　　結(jié)果：
　　實驗結(jié)果表明：（1）通過與對照品的保留時間比對，初步確定篩選出的姜黃素

5、類活性成分是姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素；（2）細胞與活性成分間的結(jié)合能力與化合物在中藥中的含量無關(guān)，微量姜黃素類活性化合物可能有較強的抗癌活性，中藥抗癌機制有多成分、多靶點的作用特點；（3）姜黃素類活性成分可作用在癌細胞的膜和器上，可作為磷脂酶C的抑制劑；（4）HFL/SME和Stirrer-L/SME的萃取機制是纖維壁孔或攪拌子通過與目標分析物形成電荷轉(zhuǎn)移超分子的吸附以及有機溶劑的萃取的共同作用；（5）HFL/SME和S

6、tirrer-L/SME操作簡單、快速、富集倍數(shù)高、無需任何特殊裝備。
　　結(jié)論：
　　HFCF-HPLC與HFL/SME或Stirrer-L/SME結(jié)合可以對姜黃、郁金、莪術(shù)中微量姜黃素類抗癌活性成分、作用靶點及其含量進行研究，驗證中藥多成分、多靶點的作用特點，為闡明了中藥的藥效物質(zhì)基礎，建立中藥個性化的活性成分質(zhì)量標準提供科學依據(jù)和試驗方法。另外HFL/SME和Stirrer-L/SME是兩種簡單、快速、濃縮倍數(shù)高、環(huán)境