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文檔簡介
1、該論文從建立蝸牛殼聚糖內(nèi)切酶活性檢測手段入手,研究了影響酶活性的一系列因素,同時對現(xiàn)有的實驗方法進行了比較,確定了純化的最佳條件,設(shè)計出一套可行的實驗方案,對蝸牛酶進行了純化,獲得了以下結(jié)果:1.考察了蝸牛酶活性檢測方法,最終選擇對羥基苯甲酸酰肼(p-hydroxybenzonic acide hydrazidde,PAHBAH)還原糖測定方法作為酶活性的測定方法.2.為了選擇酶蛋白純化的方法,該實驗比較了幾種常用的蛋白質(zhì)純化方法:1)
2、硫酸銨鹽析可以處理大量蛋白質(zhì),但對目標酶蛋白純化效果不佳.2)DEAE-Sepharose離子交換層析、凝膠過濾、疏水作用層析、羥基磷灰石層析對蝸牛酶均有較好的分離效果.羥基磷灰石層析結(jié)果顯示目標酶是中性或酸性蛋白質(zhì).3.在對各種層析方法實際效果進行分析的基礎(chǔ)上,設(shè)計出一套較為合理而有效的純化蝸牛酶的方案.首選采用疏水作用層析,收集酶活性組分用DEAE-Sepharose 離子交換層析進行第二步分離,活性高組分經(jīng)Sephacry1 S-
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