新生小鼠肝臟巨噬細胞對NK細胞調控不足致膽道閉鎖的機理研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面展開論述：
　　第一部分：不同年齡小鼠肝臟巨噬細胞受RRV作用后分泌及表達影響NK細胞功能的細胞因子及膜配體的變化
　　目的：探討新生鼠肝臟MΦ受RRV刺激活化后分泌及表達的可調控肝臟NK細胞功能的細胞因子及膜配體的變化
　　方法：RRV分別刺激新生小鼠和成年小鼠肝臟MΦ12h、24h、36h、48h及60h，然后在上述時間點檢測細胞上清液中IL-12、IL-23、IL-10及TNF-α的濃度及肝臟

2、MΦ表達Rae-1、CD40陽性細胞比例，確立峰值濃度的作用時間點。
　　結果：新生小鼠肝臟MΦ分泌的IL-12、IL-23、TNF-α及表達的CD40均低于成年小鼠（P＜0.05），但新生小鼠分泌肝臟MΦ分泌的IL-10及表達的Rae-1要高于成年小鼠（P＜0.05）。新生小鼠IL-12、IL-23、IL-10及TNF-α的峰值濃度作用時間分別為24h、24h、60h、12h，成年小鼠的IL-12、IL-23、IL-10及TNF

3、-α的峰值濃度作用時間分別為36h、36h、36h、48h；新生小鼠Rae-1及CD40陽性峰值細胞比例的時間分別為24h、24h，成年小鼠Rae-1及CD40陽性峰值細胞比例分別為48h、36h。
　　結論：新生小鼠肝臟MΦ表達IL-12、IL-23、TNF-α及CD40明顯低于成年小鼠，而Rae-1、IL-10的表達高于成年小鼠。
　　第二部分:新生小鼠巨噬細胞對肝臟NK細胞調控不足的關鍵細胞因子探討
　　目的：探

4、討RRV刺激后新生鼠肝臟MΦ調控肝臟NK細胞的關鍵細胞因子的變化
　　方法：分別將新生小鼠和成年小鼠的肝臟MΦ和肝臟NK細胞共培養(yǎng)后給予RRV刺激，分別在IL-12及IL-10的峰值濃度時間點處中和IL-12及IL-10，評估阻斷前后不同年齡小鼠NK細胞CD69及胞內IFN-γ、TNF-α的表達水平。
　　結果：IL-12阻斷后，新生小鼠CD69的表達較阻斷前下降（P<0.05），而成年小鼠CD69的表達并無顯著性差異（P＞

5、0.05）；新生小鼠、成年小鼠阻斷前后NK細胞表達IFN-γ均無顯著性差異（P＞0.05）；新生小鼠NK細胞的TNF-α阻斷前后無明顯變化（P＞0.05），但成年小鼠NK的TNF-α阻斷后明顯降低（P＜0.05）。IL-10阻斷后，新生小鼠CD69、IFN-γ的表達明顯升高（P<0.05），而成年小鼠在IL-10阻斷前后，CD69、IFN-γ的表達并無顯著性差異（P＞0.05）。新生小鼠NK細胞的TNF-α無明顯變化（P＞0.05），但

6、成年小鼠NK的TNF-α明顯升高（P<0.05）。
　　結論：IL-10對成年小鼠NK細胞表達TNF-α的促進作用及IL-10對TNF-α表達的抑制作用均大于新生小鼠。IL-12并非決定NK細胞胞內IFN-γ的關鍵因素，新生小鼠IL-10對NK細胞IFN-γ的調控不足可能是發(fā)生BA的原因
　　第三部分：新生小鼠巨噬細胞對肝臟NK細胞調控不足的關鍵細胞連接信號的探討
　　目的：探討RRV刺激后新生鼠肝臟MΦ調控肝臟NK細

7、胞的關鍵膜蛋白配體。
　　方法：分別將新生小鼠和成年小鼠的肝臟MΦ和肝臟NK細胞共培養(yǎng)后給予RRV刺激，分別在Rae-1及CD40的峰值陽性細胞比例時間點處阻斷Rae-1及CD40，評估阻斷前后不同年齡小鼠NK細胞CD69及胞內IFN-γ、TNF-α的表達水平。
　　結果：CD40阻斷后新生及成年小鼠NK細胞TNF-α、CD154表達下調，阻斷前后IFN-γ無明顯變化。Rae-1阻斷后，新生小鼠肝臟NK細胞表達IFN-γ明顯