磁敏性纖維素酶的制備及其特性.pdf

1、殼聚糖(chitosan)是甲殼素脫乙?；漠a(chǎn)物，是一種氨基多糖。由于具有成本低、可生物降解、有生物相容性、無(wú)毒、生物親和性好、易于化學(xué)改性等優(yōu)點(diǎn)，殼聚糖被廣泛應(yīng)用于生化、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域，是很有前景的生物高分子。磁性殼聚糖微球是一種新型的功能高分子材料，它是指內(nèi)部含有磁性金屬或金屬氧化物(鐵、鈷、鎳及其氧化物)的超細(xì)粉末而具有磁響應(yīng)性的殼聚糖微球。磁性殼聚糖微球可作為固定化酶的載體，從而提高酶的操作穩(wěn)定性和酶的反復(fù)利用程度。本論文研究了磁性

2、殼聚糖微球的制備，以及分別用物理吸附和化學(xué)結(jié)合法制備固定化纖維素酶，考察了其酶學(xué)性能。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下： (1)磁性殼聚糖微球制備的條件 為了得到球形較好，粒徑較為均勻以及磁響應(yīng)性好的磁性殼聚糖微球，本論文通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究了包括殼聚糖濃度、攪拌速度、表面活性劑用量、磁粉用量等因素對(duì)磁性殼聚糖微球的影響。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，在殼聚糖用量為0.7g，攪拌速度為400r／min，石蠟用量為50ml，正丁醇用量為4ml，Span-80

3、用量為2ml，甲醛和戊二醛用量分別為2ml和1.5ml的條件下可以制備較好的磁性殼聚糖微球。 (2)物理吸附法制備磁敏性固定化纖維素酶 采用物理吸附法，在上述制備的磁性殼聚糖微球上固定化纖維素酶。研究了在不同條件下的纖維素酶固載量及其活性。研究發(fā)現(xiàn)，在吸附時(shí)間為30min，酶液濃度為2mg/ml，pH值為3時(shí)可以得到最大的固載量；在溫度為70℃，pH值為6的條件下，固定化纖維素酶的酶活最高。 (3)化學(xué)結(jié)合法制備

4、磁敏性固定化纖維素酶 在物理吸附法的基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究了化學(xué)法制備固定化纖維素酶。采用了二元法，通過(guò)利用殼聚糖微球上的氨基和活化后的羥基來(lái)固定化纖維素酶，在研究了不同活化方法后，最終采用先用EDC活化羥基，后用戊二醛固定化的方法固定化纖維素酶。研究了不同因素對(duì)固定化酶以及酶活的影響，發(fā)現(xiàn)在反應(yīng)時(shí)間為30min，反應(yīng)溫度為50℃時(shí)固載量最大；在酶解反應(yīng)中，pH值為6，反應(yīng)溫度為70℃時(shí)固定化纖維素酶酶活最高。 (4)研究了磁