變應原sIgE的納米磁微?；瘜W發(fā)光測定方法研究.pdf

1、目的：建立用于臨床變應原檢測的納米磁微?；瘜W發(fā)光法，并驗證其靈敏度、準確度、特異性、重復性以及穩(wěn)定性等性能；為臨床應用提供一種準確、快速、同時可針對多種變應原檢測且適合我國患者應用的檢測方法。
　　方法：采用流行病學調(diào)查結(jié)果選擇臨床發(fā)病率高且病情較嚴重的變應原作為本次研究對象；采用信噪比的評估方式確定化學發(fā)光底物液試劑的最佳濃度、合適的免疫反應條件、合適粒徑的納米磁微粒和鏈霉親和素磁微粒最佳工作濃度以及生物素化變應原最佳使用濃度以

2、及HRP標記鼠抗人IgE最佳工作濃度；根據(jù)WHO對變態(tài)反應性疾病的分級標準選擇標準曲線合適的濃度范圍；根據(jù)“體外診斷試劑分析性能評估指導原則”對所建立方法的性能進行評價；并依據(jù)“體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則”對此方法進行臨床評估。
　　結(jié)果：1、化學發(fā)光反應體系中：發(fā)光底物A液中魯米諾濃度為0.4mg/ml、發(fā)光底物 B液中過氧化氫脲濃度為0.2mg/ml。此發(fā)光反應體系對HRP的敏感性很高，可檢測到HRP的最小量為0.01n

3、g/ml。在免疫反應中，加入底物A液和B液后室溫避光反應5分鐘檢測，但在5-30分鐘內(nèi)檢測數(shù)值均有效。2、研究課題釆用二步法，且每一步最佳的免疫反應條件為37℃孵育15分鐘。3、納米磁微粒選擇粒徑100nm用于此研究課題效果最好，鏈霉親和素磁微粒的最佳工作濃度為2.5μg/ml;12種生物素化變應原分別具有最佳使用濃度；鼠抗人IgE-HRP的最佳工作濃度為0.25μg/mlo4根據(jù)臨床需求研究課題選擇0.35100IU/ml范圍作為標準

4、曲線。5、研究課題所建立的變應原檢測方法的靈敏度、準確度、特異性、重復性以及穩(wěn)定性均符合國家對體外診斷試劑的要求。6、根據(jù)1202例臨床試驗結(jié)果，所研究方法與目前Uni-CAP結(jié)果的診斷一致率在90％以上，而且通過本次臨床試驗可知蒿屬花粉和戶塵滿是我國最主要的致敏變應原。
　　結(jié)論：1、建立了納米磁微粒化學發(fā)光法，且其靈敏度、準確度、特異性、重復性及穩(wěn)定性均達到了設計的要求，符合國家規(guī)定，更能滿足臨床需求。2、通過臨床試驗可知所建