GRN基因與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及PTGER4基因與強直性脊柱炎的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 GRN基因多態(tài)性與漢族人群類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的關(guān)聯(lián)研究
　　類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一種慢性炎癥性疾病，以滑膜炎、滑膜關(guān)節(jié)的漸進(jìn)侵蝕及軟骨破壞為特征，發(fā)病人群占全世界人口的0.5％到1％。已被證明，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機制與遺傳因素密切相關(guān)，并有越來越多的研究表明，遺傳易感性可能促成類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的臨床表型。盡管易感基因HLA-DRB1是人們認(rèn)

2、為其與RA發(fā)病相關(guān)最強的基因，而又許多研究發(fā)現(xiàn)非HLA基因在RA遺傳易感性中同樣具有重要作用。以單核苷酸多態(tài)性(single nucleotidepolymorphisms，SNP)為基礎(chǔ)的病例-對照關(guān)聯(lián)性研究能有效的鑒別這些非HLA位點。
　　顆粒蛋白前體(progranulin，PGRN)是由染色體17q32上的GRN基因編碼的一種生長因子，包含7.5個重復(fù)的富含半胱氨酸基序(p-g-f-b-a-c-d-e)，其中A-G是完全

3、重復(fù)序列而P是半重復(fù)序列。PGRN介導(dǎo)多種生理和病理的過程，包括早期胚胎發(fā)育、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、傷口愈合、腫瘤發(fā)生和炎癥進(jìn)程。研究證實PGRN通過結(jié)合腫瘤壞死因子受體(tumor necrosis factor receptors，TNFR)干擾TNFR/TNFα間的相互作用，可治療小鼠膠原蛋白誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎，同時發(fā)現(xiàn)在RA患者的血清中，PGRN表達(dá)水平明顯升高，通過檢測PGRN的表達(dá)水平可能是監(jiān)測RA患者疾病活動的一種有效方法。
　　

4、目的:本研究旨在探討中國漢族人群GRN基因單核苷酸多態(tài)性與RA易感性的關(guān)系。
　　方法:收集就診于山東省立醫(yī)院風(fēng)濕免疫科RA患者738例和山東省立醫(yī)院健康查體中心782例健康對照者，采用TaqMan-PCR法對GRN基因的八個SNPs(rs3859268, rs3785817, rs4792938, rs4792939, rs9897526, rs25646, rs850713和rs5848)分別進(jìn)行基因分型，結(jié)合RA患者臨床表型

5、對SNPs的連鎖不平衡和單倍型進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果:1.經(jīng)Hardy-Weinberg平衡(HWE)檢驗，所有GRN基因多態(tài)性位點在兩組人群中的基因頻率及基因型頻率的分布均符合HWE檢驗(P＞0.05)。
　　2.統(tǒng)計分析結(jié)果經(jīng)Bonferroni校正后，GRN基因rs3859268位點C/T等位基因在RA組及正常對照組頻率分布(10.0％vs13.8％;90.0％vs86.2％)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.009,OR

6、=0.69,95％CI0.55～0.86)，CC/CT/TT基因型在RA組及對照組頻率分布(1.1％vs2.7％;17.8％vs22.3％;81.2％vs75.1％)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.037,OR=0.37,95％CI0.16～0.85;P=0.037,OR=0.74,95％0.57～0.95);GRN基因rs9897526位點A/G等位基因在RA組和正常對照組頻率分布(8.3％vs12.2％;91.7％vs87.8％)差異具有

7、統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.003,OR=0.65,95％CI0.51～0.82);AA/AG/GG基因型在RA組及對照組頻率分布(1.2％vs2.0％;14.1％vs20.3％;84.7％vs77.6％)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.016,OR=0.55,95％CI0.24～1.25;P=0.016,OR=0.64,95％CI0.48～0.83)。余位點的等位基因和基因型在RA組和正常對照組中的頻率分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

8、>　　3.GRN基因rs3859268位點和rs9897526位點基因型與RA患者臨床及實驗室指標(biāo)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，未發(fā)現(xiàn)兩位點與RA患者的性別、年齡、病程長短、DAS28評分、ESR、CRP、RF及CCP等實驗室及臨床指標(biāo)具有關(guān)聯(lián)性(P＞0.05)。
　　4.LD分析顯示8個SNP位點(rs3859268,rs3785817,rs4792938,rs4792939,rs9897526,rs25646,rs850713和rs5848)

9、與中國漢族RA人群存在較弱的LD;SHEsis統(tǒng)計學(xué)軟件分析結(jié)果提示，GRN基因的各位點形成的單倍體型與RA之間不存在相關(guān)性(P＞0.05)。
　　結(jié)論:GRN基因rs3859268位點的C等位基因、CC基因型、CT基因型以及rs9897526位點的A等位基因、AA基因型、AG基因型均降低了RA的發(fā)病風(fēng)險。提示GRN基因多態(tài)性與中國漢族RA人群的易感性可能存在相關(guān)性。
　　第二部分 PTGER4基因多態(tài)性與山東漢族人群強直性

10、脊柱炎易感性的關(guān)系
　　強直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)是一種慢性炎癥性中軸關(guān)節(jié)病，主要累及骶髂關(guān)節(jié)、椎旁小關(guān)節(jié)和外周關(guān)節(jié)，后期可造成關(guān)節(jié)纖維化和骨性強直。遺傳易感性在AS發(fā)病中可能發(fā)揮著重要作用，其具體免疫病理機制尚不明確。眾所周知，腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor，TNF-α)在炎癥性關(guān)節(jié)病中起到重要作用，抗腫瘤壞死因子拮抗劑的治療已成功應(yīng)用于AS的臨床治療，但仍有

11、部分患者沒有達(dá)到臨床緩解，提示其他炎癥因子可能參與AS的發(fā)病。以單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNP）為基礎(chǔ)的病例-對照關(guān)聯(lián)性研究已經(jīng)廣泛應(yīng)用于疾病易感基因的探索，進(jìn)一步結(jié)合分子細(xì)胞及蛋白水平的研究旨在疾病尋找新的治療靶點。
　　前列腺素E受體4(prostaglandin E receptor4,PTGER4)基因位于人染色體5p13.1,編碼前列腺素E2受體EP4,是前列腺素E

12、2(prostaglandin E2,PGE2)的受體之一，與骨的生成、自身炎癥反應(yīng)和腫瘤轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。通過全基因關(guān)聯(lián)研究分析，發(fā)現(xiàn)PTGER4與西歐后裔AS易感性相關(guān)，但PTGER4基因與山東漢族人群AS尚未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。
　　目的:探討PTGER4基因單核苷酸多態(tài)性(SNP)與山東漢族人群AS的關(guān)系。
　　方法:通過病例-對照相關(guān)性研究，利用TaqMan-PCR基因分型法對600例AS患者（AS組）和620例正常健康人（

13、正常對照組）PTGER4基因SNPs位點rs7726237、rs4133101和rs16870224進(jìn)行基因分型，計算各位點基因型及等位基因分布頻率，比較兩組各位點之間基因型及等位基因頻率分布差異。
　　結(jié)果:1.經(jīng)Hardy-Weinberg平衡(HWE)檢驗，所有PTGER4基因多態(tài)性位點在兩組人群中的基因頻率及基因型頻率的分布均符合HWE檢驗(P＞0.05)。
　　2.PTGER4基因rs7726237位點A/G等位基

14、因在AS組和正常對照組頻率分布(78.5％vs21.5％;74.7％vs25.3％)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.026,OR=0.81,95％ CI0.67～0.97);GG/AG/AA基因型在AS組及對照組頻率分布(5.3％vs5.2％;32.3％vs40.3％;62.3％54.5％)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.014,OR=0.90，95％CI0.54～1.51;P=0.014,OR=0.70,95％ CI0.55～0.89)。PT

15、GER4基因rs4133101位點和rs16870224位點在AS組和正常對照組中的頻率分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.經(jīng)Haploview4.2軟件測定結(jié)果顯示PTGER4基因rs7726237和rs16870224形成一個LD單倍體域;單倍型分析結(jié)果顯示僅有CAA/CAG/TAG/TGG4種單倍型頻率大于3％，但這4種單倍型與疾病風(fēng)險性無關(guān)(P＞0.05)。
　　結(jié)論: PTGER4基因多態(tài)性與山東漢族