MICAL-1 CH結(jié)構(gòu)域的折疊和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的初步研究.pdf

1、隨著人類基因組規(guī)?；瘻y序的結(jié)束，人們越來越關(guān)注蛋白質(zhì)折疊問題。具有正確三級結(jié)構(gòu)，對于蛋白質(zhì)行使功能十分重要。錯誤折疊的蛋白質(zhì)能形成一系列疾病，例如人類的一些淀粉狀纖維變性病。只有透徹地了解蛋白質(zhì)折疊過程中的一系列基本事件，才有可能最終了解蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。研究蛋白質(zhì)折疊不僅具有重大的科學(xué)意義，更在醫(yī)學(xué)和生物工程領(lǐng)域具有極大的應(yīng)用價值。本研究中選用了人MICAL-1 CH結(jié)構(gòu)域為模型，主要采用核磁共振技術(shù)和天然態(tài)下氫氘交換相結(jié)合

2、的方法研究CH結(jié)構(gòu)域的折疊特性。 MICAL-1 CH結(jié)構(gòu)域有109個氨基酸，其三級結(jié)構(gòu)由6個螺旋和一個3<,10>螺旋組成，整個分子形成了2個疏水核心。為了更全面深入地了解MICAL-1 CH結(jié)構(gòu)域的折疊過程，除了應(yīng)用核磁共振和自然態(tài)下氫氘交換相結(jié)合的方法，還使用了一些常規(guī)的光譜學(xué)方法，如熒光光譜(fluorescence)、圓二色譜(CD)對蛋白質(zhì)折疊進行了研究。 首先用蛋白質(zhì)內(nèi)源熒光光譜和CD光譜研究了鹽酸胍(

3、GdmCl)誘導(dǎo)的MICAL-1 CH結(jié)構(gòu)域去折疊過程的熱力學(xué)。發(fā)現(xiàn)MICAL-1 CH結(jié)構(gòu)域的變性主要發(fā)生在2-4 M GdmCl范圍內(nèi)，蛋白變性的Cm值大約為2.5 M GdmCl。蛋白質(zhì)去折疊的自由能是7.11±0.58 kcal mol<'-1>，結(jié)構(gòu)對鹽酸胍的敏感度m大小為2.82±0.23 kcal mol<'-1>M<'-1>。 以此為根據(jù)，進行了變性劑濃度在0-1.4 M GdmCl范圍內(nèi)的自然態(tài)下氫氘交換實驗