MiR-204介導(dǎo)蛋白酶活化受體-2(PAR2)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞遷移的研究TTK蛋白激酶的表達(dá)與結(jié)直腸癌患者預(yù)后的關(guān)系.pdf

1、結(jié)直腸癌(colorectal cancer，CRC)是世界上常見(jiàn)的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率分別位居第三位和第四位。近年來(lái)，外科術(shù)式的不斷改進(jìn)和放化療方案的不斷完善極大程度地改善了結(jié)直腸癌的治療效果，但是仍有70％-80％的患者死于結(jié)直腸癌的復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移(Kerr，2003)。結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和耐藥是影響患者預(yù)后的重要因素。PAR2是一種具有七次跨膜結(jié)構(gòu)域的G蛋白偶聯(lián)受體，參與炎癥反應(yīng)、腫瘤的發(fā)生發(fā)展等過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)

2、PAR2通過(guò)miR-125b調(diào)控其下游靶基因Gab2，從而促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的遷移。本論文在前期研究的基礎(chǔ)上探究(1)miR-204介導(dǎo)PAR2誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞遷移的分子機(jī)制，(2)酪氨酸和蘇氨酸蛋白激酶(tyrosine and threonine protein kinase，TTK)與結(jié)直腸癌患者預(yù)后的相關(guān)性。
　　筆者發(fā)現(xiàn)PAR2活化后可以負(fù)向調(diào)控miR-204的表達(dá)，而穩(wěn)定敲降PAR2后miR-204的水平顯著上調(diào)。此外，過(guò)表達(dá)

3、miR-204可以抑制腫瘤細(xì)胞的遷移;反之，敲降miR-204則促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的遷移。重要的是，過(guò)表達(dá)miR-204可以顯著阻斷PAR2活化誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移。因此，PAR2活化調(diào)控miR-204的表達(dá)，而后者與腫瘤細(xì)胞的遷移密切相關(guān)。為了鑒定miR-204可能的下游靶基因，首先利用Targetsan、MIRDB等軟件進(jìn)行預(yù)測(cè)，然后與已有的PAR2信號(hào)相關(guān)的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)，篩選出可能受miR-204和PAR2共同調(diào)控的四個(gè)靶基因MYO1

4、0、ACSL4、USP47、NUAK1，并通過(guò)激活或者敲降PAR2、雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)證實(shí)了MYO10和ACSL4是miR-204的直接靶基因，并且與PAR2相關(guān)。最終進(jìn)行細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)miR-204通過(guò)其下游靶基因MYO10和ACSL4介導(dǎo)了PAR2誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞遷移。有趣的是，靶基因預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)顯示:PAR2相關(guān)的3個(gè)miRNAs(miR-204、miR-205和miR-34a)皆可靶向ACSL4的3'UTR區(qū)。但是后續(xù)研究顯示這三

5、個(gè)miRNAs對(duì)ACSL4的調(diào)控并無(wú)顯著的協(xié)同作用。
　　酪氨酸和蘇氨酸蛋白激酶(Tyrosine and Threonine Kinase，TTK)是一類可磷酸化絲氨酸、蘇氨酸以及酪氨酸殘基的雙特異性蛋白激酶，在有絲分裂中心體的復(fù)制和染色體的正確分離中具有重要的作用。利用氧化偶氮甲烷(AOM)-葡聚糖硫酸鈉(DSS)建立結(jié)腸炎相關(guān)的結(jié)腸癌模型，結(jié)腸組織轉(zhuǎn)錄組芯片結(jié)果提示TTK與CRC發(fā)生相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)首次驗(yàn)證TTK的mRNA和蛋白