反義核苷酸抑制Pokemon基因表達(dá)的抑癌效應(yīng)研究.pdf

1、Pokemon被鑒定為ARf的抑制劑，在細(xì)胞轉(zhuǎn)化的時(shí)候具有重要作用，然而Pokemon功能仍然不清楚。本文運(yùn)用反義核苷酸靶向Pokemon的mRNA后特異的抑制基因表達(dá)，并研究了抑制Pokemon基因后對細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響，并確定是否通過P53途徑發(fā)揮作用。 利用RT-PCR的方法，并比較不同細(xì)胞內(nèi)Pokemon基因的mRNA水平，確定了高表達(dá)Pokemon基因的MCF-7和HepG-2細(xì)胞模型。同時(shí)用RT-PCR法克隆

2、Pokemon基因，構(gòu)建出能在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)Pokemon基因的載體Pokemon-EGFP質(zhì)粒。在COS-7細(xì)胞內(nèi)用共轉(zhuǎn)染Pokemon-EGFP質(zhì)粒和反義核苷酸，結(jié)果顯示，ANP4對Pokemon-EGFP質(zhì)粒表達(dá)綠色熒光抑制效率最高，達(dá)78％。 利用半定量RT-PCR和Western-blot來檢測ANP4對Pokemon的mRNA、蛋白水平表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明ANP4能下調(diào)Pokemon的tuRNA、蛋白表達(dá)水