神經(jīng)節(jié)苷脂GD1a在無血清條件下誘導(dǎo)FBJ細(xì)胞凋亡.pdf

1、神經(jīng)節(jié)苷脂(Gangliosides)是一類含唾液酸的鞘糖脂,存在于細(xì)胞膜的外表面。在胚胎形成、細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化和細(xì)胞轉(zhuǎn)移等生理現(xiàn)象中發(fā)揮著重要作用。本文闡述了神經(jīng)節(jié)苷脂GD1a的一種新的功能即誘導(dǎo)FBJ病毒感染的小鼠骨肉瘤細(xì)胞產(chǎn)生凋亡。在無血清培養(yǎng)條件下,富含GD1a的FBJ-S1細(xì)胞趨向死亡,而缺乏GD1a的FBJ-LL細(xì)胞卻卻未見明顯影響。通過流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行膜聯(lián)蛋白V異硫氰酸熒光素(FITC-AnnexinV)和碘化

2、丙啶(PI)雙染檢測(cè)和細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)FBJ-S1細(xì)胞在無血清條件下趨向死亡是因凋亡而引起的。因此,我們推測(cè)GD1a可誘導(dǎo)FBJ細(xì)胞凋亡。為了驗(yàn)證這一推論,外源性GD1a在無血清培養(yǎng)條件下處理FBJ-LL細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)FBJ-LL細(xì)胞出現(xiàn)死亡。FBJ-S1細(xì)胞通過加入葡萄糖苷神經(jīng)酰胺合成酶抑制劑(D-PDMP)處理和轉(zhuǎn)染入唾液酸轉(zhuǎn)移酶(st3ga15)的siRNA的來抑制GD1a的合成,發(fā)現(xiàn)在無血清條件下經(jīng)D-PDMP處理后FBJ-S1細(xì)胞

3、抵抗死亡,且轉(zhuǎn)染siRNA到FBJ-S1細(xì)胞后得到的單克隆細(xì)胞也同樣抵抗死亡。另外,很多文章報(bào)道神經(jīng)酰胺和神經(jīng)節(jié)苷脂GD3可誘導(dǎo)凋亡,但在發(fā)生凋亡的FBJ細(xì)胞中神經(jīng)酰胺的表達(dá)含量并沒有變化,而GD3并未見在FBJ細(xì)胞中表達(dá),這說明神經(jīng)酰胺和GD3不是引起FBJ細(xì)胞凋亡的因素。
　　 窖蛋白1(caveolin-1,亦譯為小窩蛋白1)是一種腫瘤抑制蛋白。本文研究發(fā)現(xiàn),窖蛋白1參與了GD1a誘導(dǎo)的FBJ細(xì)胞凋亡并起著關(guān)鍵作用。FBJ

4、-S1細(xì)胞在無血清條件下趨向死亡,而FBJ-LL細(xì)胞并未出現(xiàn)此現(xiàn)象,逆轉(zhuǎn)錄PCR法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)FBJ-S1細(xì)胞中窖蛋白1的表達(dá)量是FBJ-LL細(xì)胞的5倍。FBJ-LL細(xì)胞在外源性GD1a處理后促進(jìn)其趨向死亡,免疫印跡法(Western blot)發(fā)現(xiàn)窖蛋白1的表達(dá)量也明顯增加。另外,利用siRNA技術(shù)沉降FBJ-S1細(xì)胞中窖蛋白1的表達(dá)量,無血清培養(yǎng)條件下,結(jié)果使其存活。數(shù)據(jù)表明窖蛋白1可促進(jìn)FBJ細(xì)胞的凋亡。存活蛋白(survivin,亦

5、譯為生存蛋白或生存素)是一種凋亡抑制蛋白,研究發(fā)現(xiàn)窖蛋白1可以調(diào)節(jié)存活蛋白,且存活蛋白也參與了GD1a誘導(dǎo)的FBJ細(xì)胞凋亡。
　　 FBJ-LL細(xì)胞可在無血清培養(yǎng)條件下存活,我們推測(cè)FBJ-LL細(xì)胞可能分泌一種或多種生長因子。因此我們隨機(jī)檢測(cè)了FBJ-LL和FBJ-S1細(xì)胞中一些生長因子的mRNA水平表達(dá),發(fā)現(xiàn)FBJ-LL細(xì)胞中生長因子如PDGFα-TNFα和VEGFB的表達(dá)量是FBJ-S1細(xì)胞中的數(shù)倍,且FBJ-S1細(xì)胞在無血