棉鈴蟲(chóng)組織蛋白酶B組織分布及不同發(fā)育階段的表達(dá)研究.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)室從棉鈴蟲(chóng)卵巢中純化得到了一種蛋白酶,通過(guò)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)得其分子量為30kDa,根據(jù)其能被半胱氨酸蛋白酶的特異性抑制劑E-64抑制,鑒定出這是一種半胱氨酸蛋白酶,又通過(guò)對(duì)其氨基酸N端序列的測(cè)定確認(rèn)它屬于組織蛋白酶B.該文在前人工作的基礎(chǔ)上,利用從大腸桿菌BL21菌株中純化得到的重組表達(dá)的棉鈴蟲(chóng)組織蛋白酶B免疫家兔,制備了兔抗HCB抗血清,該抗血清不但識(shí)別大腸桿菌中表達(dá)的重組棉鈴蟲(chóng)組織蛋白酶B,還可以識(shí)別Pichia酵

2、母、昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)的重組棉鈴蟲(chóng)組織蛋白酶B以及棉鈴蟲(chóng)卵巢勻漿液內(nèi)的組織蛋白酶B.通過(guò)免疫印跡法檢測(cè)到棉鈴蟲(chóng)卵、幼蟲(chóng)血淋巴、中腸、表皮、脂肪體、雌、雄蛹脂肪體、雌性成蟲(chóng)卵巢、脂肪體和雄性成蟲(chóng)脂肪體中有棉鈴蟲(chóng)組織蛋白酶B的分布.原位水解的結(jié)果顯示只有棉鈴蟲(chóng)卵、卵巢和雌性成蟲(chóng)脂肪體中的棉鈴蟲(chóng)組織蛋白酶B具有水解蛋白的活性.同時(shí),我們制備了不同性別、不同發(fā)育時(shí)期的棉鈴蟲(chóng)各組織的組織切片,通過(guò)免疫組織化學(xué)法對(duì)棉鈴蟲(chóng)組織蛋白酶B進(jìn)行了組織定位,結(jié)果顯

3、示棉鈴蟲(chóng)幼蟲(chóng)中腸、表皮雌蛹脂肪體、雌性成蟲(chóng)卵巢、脂肪體和雄性成蟲(chóng)脂肪體中有較深的顏色反應(yīng).從結(jié)果中還可以看出,在棉鈴蟲(chóng)表皮的細(xì)胞和幾丁質(zhì)層中都有組織蛋白酶B存在;卵巢組織中,濾泡細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中有均勻的顏色反應(yīng),在濾泡細(xì)胞膜表面有較深的顏色反應(yīng),說(shuō)明組織蛋白酶B均勻分布于濾泡細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中,在細(xì)胞膜上有較多的分布,另外卵黃顆粒表面也有顏色反應(yīng),因此棉鈴蟲(chóng)卵母細(xì)胞中也有組織蛋白酶B的分布.該實(shí)驗(yàn)探明了組織蛋白酶B在棉鈴蟲(chóng)體內(nèi)的組織分布,并對(duì)其進(jìn)